怎样提取
Extracting Linarin, a Natural Active Ingredient from Wild Chrysanthemum
ＣＨＡＩＨｏｎｇ－ｌｉｎｇ，ＷＵＬｉｎ－ｓｅｎ，ＪＩＮXｉａｏ－ｃｈｕｎ
（ＢｒａｎｃｈｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＬｉｓｈｕｉＶｏｃａｔｉｏｎａｌａｎｄＴｅｃｈｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｌｉｓｈｕｉ３２３０００，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎｗａｓｕｓｅｄｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｌｉｎａｒｉｎｆｒｏｍｗｉｌｄｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｂｙｍａｔｒｉｘｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＴｈｅｏｐｅｒａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｗａｓａｄｄｉｎｇＳｉｌｉｃａＧｅｌ－Ａｌｕｍｉｎａ－ＰｏｌｌｅｎｉｎｔｏｔｈｅＰＴＦＥｃｏｒｅｆｉｒｓｔｌｙ，ｔｈｅｎｐｏｌａｒｉｔｙｅｌｕｔｉｎｇｗｉｔｈｓｏｌｕｔｉｏｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｈｅｘａｎｅ－ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ－ａｃｅｔｏｎｅ，ａｎｄｆｉｎａｌｌｙｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｌｉｎａｒｉｎｃｏｎｔｅｎｔ
ｂｙＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｌｉｎａｒｉｎｆｒｏｍｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎ
ｃｅｗａｓｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ１．５ｈａｔ３０℃ ｗｉｔｈａｎｅｌｕｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｒａｔｉｏｏｆ１∶2∶3．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｏｆｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ；ｌｉｎａｒｉｎ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎ；ＨＰＬＣ
野菊花（Flos Chrysanthemi Indici）具有抗病原微生物、心血管系统疾病、降压、降低血小板聚集的影响、抗炎、免疫、抗氧化等作用［１］。此外还用于肿瘤、高血压和高血脂等症，对感冒、流行性脑膜炎也有一定预防作用［２，３］。
蒙花苷是众多黄酮类化合物中活性较高的化合物之一，由刺槐素和一个苷元组成，化学结构式见图１。蒙花苷又称刺槐苷、金合欢因、野菊花黄酮苷、刺槐素－７－Ｏ－β－Ｄ－芸香糖苷等，以两种异构体形式的化合物α体和β体。蒙花苷及其衍生物在植物界分布广泛，存在于许多植物的花、叶、果实中，多以苷的形式存在。其中以野菊花花序中含量最多，是野菊花中重要的药效成分［６，７］。近年来国内外研究表明，蒙花苷具有非常广泛的生理和药理活性，对预防糖尿病和改善糖尿病有显著的 作用，还具有抑制磷酸二酯酶、醛糖还原酶、金黄葡萄球菌、乙型溶血链球菌、抗菌等作用［４，５］，能保护肝脏，并对慢性气管炎有一定疗效［８］。
１材料与方法
１．１材料
１．１．１野菊花试验用野菊花干燥花序购于浙江中医院中药房。将其放入研钵中研磨成粉状，装入烧杯并用保鲜膜封好，备用。 １．１．２试剂蒙花苷、正己烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、冰醋酸、氧化铝、硅胶等。
１．１．３仪器ＹＰ２０２Ｎ电子天平，上海精密科学仪器有限公司；四氟芯层析柱，上海立亚太玻璃仪器制造有限公司杭州分公司；ＷａｔｅｒｓＡｃＱｕｉｔｙ高效液相谱仪，美国Ｗａｔｅｒｓ
公司；ＵＶ２５０１ＰＣ紫外－可见分光光度计，日本导津；烧杯，研钵，漏斗，玻璃棒，移液管，容量瓶，干燥器等。
１．２方法
１．２．１蒙花苷的提取精密称取１．２ｇ野菊花花序粉、２．４ｇ硅胶和２．４ｇ氧化铝，加入２０ｍＬ去离子水，搅拌均匀后装入已固定在铁架台上的四氟芯层析柱中。每间隔１５ｍｉｎ分别加入正己烷、乙酸乙酯、丙酮进行从小到大的极性洗脱。将洗脱液进行抽滤得到黄滤液，用滤纸再次过滤，得到澄清的黄滤液即为蒙花苷提取液，放置阴暗处备用。
１．２．２单因素试验精密称取１．２ｇ野菊花花序粉，在不同的萃取时间、萃取温度、洗脱剂体积比（Ｖ正己烷∶Ｖ乙酸乙酯∶Ｖ丙酮）下进行单因素试验。结束后将洗脱液进行抽滤得到黄滤液。将黄滤液用滤纸再次过滤，得到蒙花苷提取液，去离子水定容至５０ｍＬ。测定蒙花苷在３２６ｎｍ的吸光度，并计算出相应的蒙花苷的含量。 １．２．３正交优化试验准确称取１．２ｇ野菊花花序干粉末以不同的萃取时间、萃取温度、洗脱剂体积比为考察因素，根据单因素试验的结果，再选用
Ｌ９（３３）正交表进行正交试验，因素与水平设计见表1，测定蒙花苷含量。
１．２．４高效液相谱仪的检测［９］谱柱：Ｓｙｍｍｅｔｒｙ－Ｃ１８柱（３．９ｍｍ×１５０．０ｍｍ，５μｍ），流动相∶甲醇－水－冰醋酸（５２∶４６∶２）；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长：３２６ｎｍ；柱温：３０℃，进样方式：手动进样；进样量：５μＬ。
取蒙花苷标准品１．２ｍｇ溶于甲醇，于５０ｍＬ容量瓶中定容，得蒙花苷标准品液。从中取２ｍＬ移至液相用小烧杯中，为标１。再从中分别取２ｍＬ于４只试管中，分别稀释成２、３、４、５倍，并移至小烧杯中，为标２、３、４、５。取定容的提取液各２ｍ
Ｌ于５０ｍＬ容量瓶中，用３０％乙醇稀释至刻度，１５ｍｉｎ后以空白标准液作对照，于３２６ｎｍ处测定吸光度，计算提取液的蒙花苷含量。
２结果与分析
２．１高效液相谱仪的检测
２．１．１检测波长的选择取蒙花苷标准品，用甲醇配成溶液进行２００～４００ｎｍ的光谱扫描。光谱图显示，其在２０７、２６７、３２６ｎｍ附近均有较大吸收峰。在３２６ｎｍ峰面积最大，为减少其他成分对蒙花苷测定的干扰，特选择３２６ｎｍ作为检测波长。
２．１．２线性关系的考察将标１、标２、标３分别取样５μＬ，按1．２．4所述条件进行测定，结果表明，蒙花苷在进样量为０．０４８～２．１３0 μＬ的范围内与峰面积具有良好的线性关系。以峰面积（ｙ）为纵坐标，蒙花苷浓度（ｘ）为横坐标，绘制标准曲线，得曲线的回归方程＝１９８０ｘ－７．５６0，ｒ＝０．９９９９。
２．１．３精密度试验精密吸取对照品溶液５μＬ连续进样６次，蒙花苷峰面积ＣＶ为０．７８％。
２．１．４重复性测定取样品粉末约２．４ｍｇ，按上述供试品溶液的制备方法和测定条件，制备６份供试液，蒙花苷含量测定结果的ＣＶ为１．３０％。
本文为全文原貌未安装PDF浏览器用户请先下载安装原版全文２．１．５稳定性试验分别制备对照品溶液和供试品溶液，室温下放置，分别于０、２、４、６、８、１２ｈ进样测定，记录蒙花苷谱峰峰面积，计算变异系数，结果表明，对照品溶液中蒙花苷谱峰峰面积ＣＶ为０．４８％，供试品溶液中蒙花苷谱峰峰面积ＣＶ为０．８１％，表明对照品和供试品溶液在１２ｈ内稳定。
２．１．６回收率试验采用加样回收试验，取已知含量的野菊花粉末０．１２ｇ，共６份，精密称定，按对照品加入量与所取供试品含量之比为１∶１的比例加入蒙花苷对照品，制备供试品溶液，分
别测定，计算回收率。结果表明，蒙花苷的平均回收率为９７．４％，ＣＶ为２．４２％。
２．１．７谱分析通过对图２和图３的比较，以及对照品的光谱，可以看出保留时间约在１．８９ｍｉｎ左右，可以断定这就是蒙花苷，即第３个吸收峰为蒙花苷的吸收峰。
２．２单因素试验
２．２．１萃取时间对蒙花苷提取量的影响在常温下，在不同的萃取时间下提取蒙花苷，测定提取液中蒙花苷含量，结果见图４。由图４可知，野菊花中蒙花苷提取量随萃取时间的延长而增大，但萃取１．５ｈ后，蒙花苷的含量开始降低，故萃取时间为１．５ｈ时提取效果最好。
２．２．２萃取温度对蒙花苷提取量的影响在不同温度下，用洗脱试剂体积比１∶１∶１的洗脱试剂提取１．５ｈ后，测定提取液中蒙花苷含量，结果见图５。由图５可知，野菊花中蒙花苷含量在提取温度为２５℃时最高，故提取温度以２５℃为宜。
２．２．３洗脱剂体积比对蒙花苷提取量的影响以不同洗脱剂体积比，在２５℃下，提取１．５ｈ，测定提取液中蒙花苷含量，结果见图６。由图６可知，在其他条件相同情况下，从经济角度考虑，以洗脱剂体积比１∶２∶３提取为宜。
２．３正交优化试验
由表２可以看出，最佳提取工艺为Ａ２Ｂ３Ｃ３，即萃取时间为１．５ｈ，萃取温度为３０℃，洗脱剂体积比为１∶２∶３。
３结论
利用新型的基质固相分散萃取技术提取野菊花干燥花序中天然活性成分蒙花苷，通过对样品提取条件
进行不同因素及水平比较，以及运用正交试验设计进行多因素综合分析，优选出了萃取时间、萃取温度、洗脱剂体积比３个因素的最优试验方案，建立了实用、简单、方便、易行的基质固相分散萃取蒙花苷的流程。野菊花花序中蒙花苷的最佳提取工艺条件为：萃取时间1.5 h，萃取温度为30 ℃，溶液比
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议