22食品与药品 Food and Drug 2021年第23卷第1期
三乙胺付丙月打吴伟山2，张宁打王金虎1*
*收稿日期：2020-05-29
基金项目：山东省重大科技创新工程项目(2019JZZY010520)
作者简介：付丙月，主管药师，从事新药研发和药物分析Tel: 81213293 E-mail: *********************
*通讯作者：王金虎，副主任药师，从事药物分析Tel: 81213293 E-mail: ***************
(1.山东省药学科学院山东省化学药物重点实验室，山东济南250101； 2山东中医药大学附属医院骨科,
山东济南250101)
摘要：目的建立同时测定奥贝胆酸原料药中甲醇、乙醇、异丙醇、乙睛、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四
氢咲喃、三乙胺、甲苯10种有机溶剂残留量的方法。方法采用顶空气相谱法。以Agilent DB-624^细管柱为
谱柱，经程序升温，采用氢火焰离子化检测器，外标法计算溶剂残留量。结果在此谱条件下，甲醇、乙
醇、异丙醇、乙騰、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢咲喃、三乙胺、甲苯10种待测有机残留溶剂的分离 度均大于2.0，线性、准确度、精密度良好，9批样品中10种有机溶剂残留均符合要求。结论经方法学验证，
该方法操作简单，重复性好，准确度高，适用于奥贝胆酸原料药中10中有机溶剂残留的同时测定。关键词：奥贝胆酸；气相谱法；顶空进样；有机溶剂残留
中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：1672-979X (2021) 01-0022-07
DOI : 10.3969/j.issn.l672-979X.2021.01.005
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食品与药品Food and Drug2021年第23卷第1期23
Headspace Gas Chromatography for Determination of Residual Organic Solvents in
Obacholic Acid
FU Bing-yue1,WU Wei-shan2,ZHANG Ning1,WANG Jin-hu1
(1.Shandong Provincial Key Laboratory of C hemical Drugs,Shandong Academy ofPharmaceutical Sciences,Jinan
2501010,China;2.Affiliated Hospital of S handong University of T raditional Chinese Medicine Department of
Orthopedics,Jinan2501010,China)
Abstract:Objective To establish a method for the simultaneous determination of methanol,ethanol,isopropanol, acetonitrile,dichloromethane,n-hexane,ethyl acetate,tetrahydrofuran,triethylamine and toluene.Methods headspace gas chromatography was used.Using Agilent db-624capillary column as chromatographic column,the solvent residue was calculated by external standard method with hydrogen flame ionization detector and temperature programmed. Results under this chromatographic condition,the resolution of10kinds of organic residual solvents to be determined washigher than that of methanol,ethanol,isopropanol,acetonitrile,
dichloromethane,n-hexane,ethyl acetate, tetrahydrofuran,triethylamine and toluene Two The results showed that the linearity,accuracy and precision were good,and the residue of10kinds of organic solvents in9batches of samples met the requirements.Conclusion the method is simple,reproducible and accurate.It can be used for the simultaneous determination of10organic solvent residues in obacholic acid.
Key Words:obeticholic acid;gas chromatography;headspace sampling;residual organic solvent
奥贝胆酸（obeticholic acid,OCA），商品名Ocaliva，通过活化法尼醇X受体，间接抑制细胞素7A1（CYP7A1）的基因表达，是一种法尼醇X受体特异性激动剂，由Intercept公司研发，美国FDA于2016年5月27日有条件加速批准其用于原发性胆汁性胆管炎，是近20年首个获得美国FDA 批准原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病的药物一％目前，尚未见奥贝胆酸原料药中有机溶剂残留量测定的文献报道。本文针对其合成反应中使用的甲醇、乙醇、异丙醇、乙膳、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢咲喃、三乙胺、甲苯等有机溶剂进行检测®現根据ICH和《中国药典》2015年版（四部）附录0861的相关规定，采用气相谱法（GC）顶空进样方式，对奥贝胆酸原料药中10种有机溶剂的残留量进行同时测定，以确保药品的安全性、有效性和质量可控性“刑。
1仪器与试药
1.1仪器
Agilent7890B型气相谱仪，包括氢火焰离子化检测器（FID）、7697E型顶空进样器（美国安捷伦）；XS-205型电子天平（梅特勒-托利多公司）。1.2试药
奥贝胆酸原料药（批号：20160310，纯度：99.9%；批号：20160315，纯度：99.8%；批号：20160321，纯度：99.9%；批号：20160329，纯度：99.9%；批号：20160401，纯度：99.9%；批号：20160414，纯度：99.9%；批号：20160429，纯度：99.9%；批号：20160511，纯度：99.8%；批号：20160523，纯度：99.9%），本研究院根据不同合成路线自制[6-13];N,N-二甲基甲酰胺（分析纯），甲醇（谱纯），正己烷（分析纯），乙膳（谱纯，天津康科德）；甲苯（分析纯），乙酸乙酯（分析纯），二氯甲烷（分析纯，国药集团）；四氢咲喃（分析纯），三乙胺（分析纯，天津富宇）；无水乙醇（分析纯，天津科密欧）；异丙醇（分析纯，山东禹王和天下新材料有限公司）。
2方法与结果
2.1谱条件
谱柱：Agilent DB-624毛细管柱（30mxO.53 mm, 3.0“m）；程序升温：起始温度40°C，保持6min，
以30°C/min的速率升温至220°C，保持8 min；检测器温度：220°C；进样口温度：220°C；载气：氮气，流速3.0ml/min；分流比：5:1；进样
24食品与药品Food and Drug2021年第23卷第1期
方式：顶空进样；进样瓶体积为10ml；顶空平衡
温度：85°C；平衡时间：30min.
2.2.1混合对照品溶液分别精密称量甲醇、乙醇、
异丙醇、乙騰、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四
张鲁新氢咲喃、三乙胺、甲苯，置入100ml量瓶，加入N, N-二
别为300,500,500,41,60,29,500,72,500, 89yg/ml的混合对照品溶液。
2.2.2供试品溶液精密称取奥贝胆酸50mg，置入10ml顶空瓶，加入5ml N,N-二甲基甲酰胺，密封，轻轻摇匀，即得。夏洛蒂 勃朗特
2.2.3空白溶剂对照精密量取5ml N,N-二甲基甲酰胺，置入10ml顶空瓶，密封，即得。
2.3系统适用性试验
按2.1项下谱条件，取空白溶剂和混合对照品溶液分别进样，记录谱图。由谱图可见，对照品溶液中各待测溶剂出峰顺序依次为：甲醇、乙醇、异丙醇、乙睛、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢咲喃、三乙胺、甲苯，空白溶N--甲基甲酰胺对测定无影响，混合对照品中各组分分离度良好，R值均大于2，详见图1~3。 图1空白溶剂气相谱图
i?-
2I D
-
/mini
1：甲醇；2：乙醇；3：异丙醇；4：乙購；5：二氯甲烷；6：正己烷；7：乙酸乙酯；&四氢咲喃；9：三乙
NN
图2系统适用性气相谱图
l^k I d
图3奥贝胆酸样品（批号：20160523）气相谱
图
2.4线性关系考察
分别精密量取2.2.1项下的混合对照品储备液各0.5, 1.0, 2.0, 5.0,10.0,25ml，置入25ml量瓶，加N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，制成一系列不同浓度的线性混合对照品溶液。精密量取线性混合对照品溶液5ml，置入10ml顶空瓶，密封。根据2.1项下谱条件测定，记录谱图。以对照品溶液中各待测成分质量浓度（x,yg/ml）为横坐标、峰面积（y）
表1。
表1回归方程与线性范围
2.5定量限与检岀限考察
待测成分回归方程式r y 甲醇y x0.9993 6.04〜300.17
乙醇尸5859.1x・2486.20.999610.02〜500.05异丙醇尸3957.3x・7.98910.999610.13〜500.02
乙睛^384.7x-196.460.99940.81—40.07
二氯甲烷^85.45x-0.53770.9999 1.22〜60.13
正己烷尸88282r-2281.90.99970.2〜27.01
乙酸乙酯^086.6x-245.030.999610.16〜500.20
四氢咲喃尸9515.8x・33.6710.9998 1.45—72.32
三乙胺尸27174x-1542.70.999210.09〜500.24
甲苯□529.7x・289.000.9997 1.79〜89.25
精密量取2.4项下对照品溶液（2ml-25ml）, N,N
进样测定。按信噪比（SN10:1考察定量限，结果甲醇、乙醇、异丙醇、乙睛、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢咲喃、甲苯的定量限分别为6.04,10.02,10.13,0.81, 1.22,0.55,10.16, 1.45, 10.09, 1.79y以ml。按S/N=3:l考察检测限，结果甲醇、乙醇、异丙醇、乙膳、二氯甲烷、正己烷、
乙
食品与药品Food and Drug2021年第23卷第1期25
酸乙酯、四氢咲喃、三乙胺、甲苯的定量限分别为2.01, 3.35, 3.37,0.27,0.41,0.1& 3.3&0.48, 3.36,0.60“g/ml。
2.6精密度试验
精密量取2.2.1项下的混合对照品溶液5ml，按2.1项下谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果甲醇、乙醇、异丙醇、乙膳、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢咲喃、三乙胺、甲苯峰面积的RSD 分别为2.01%, 1.26%, 1.89%, 2.20%, 2.31%, 1.74%, 1.18%, 2.63%, 2.53%, 1.90%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.7稳定性试验
取2.2.2项下供试品溶液（批号：20160523）5 ml，置入10ml量瓶，加入221项下混合对照品溶液lml，加入N,N-二甲基甲酰胺定容，摇匀，分别 于室温下放置0,2,4,6,8,10h，按2.1项下谱条件进样测定，记录峰面积。结果甲醇、乙醇、异丙醇、乙睛、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢咲喃、三乙胺、甲苯峰面积的RSD分别为1.07%,1.30%,0.97%, 1.65%, 1.74%, 1.03%,0.96%, 1.73%, 1.98%, 1.18%（n=6），表明供试品溶液在室温下放置10h内基本稳定。
2.8重复性试验
精密称取原料药样品（批号：20160523）适量，共6份，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，再按2.1项下谱条件进样测定，记录峰面积并计算样品残留量。结果甲醇、异丙醇、乙睛、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢咲喃、三乙胺、甲苯峰面积均未检出，乙醇的残留量平均值为0.02%, RSD为1.75%（n=6），表明本方法重复性良好。2.9加样回收率试验
取已知残留量原料药样品（批号：20160523）适量，共9份，分别加入低、中、高质量浓度的各待测成分对照品溶液适量，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下谱条件进样测定，记录峰面积，计算甲醇、乙醇、异丙醇、乙膳、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氢咲喃、甲苯的加样回收率，结果见表2。
表2加样回收率试验结果（n=9）
待测有机溶剂序号取样量/g样品含量/“g加入量/“g测得量/“g加样回收率/%」产均加样回收率/%RSDI%甲醇10.5002030.329.597.3698.410.51
20.5006030.530.19&69
30.501203029.498.00
40.50170150.1148.298.73
50.50100150.7147.998.14
60.50020150.4148.39&60
70.50040300.9298.199.07
80.50070300.4295.89&47
90.50110300.5296.39&60
乙醇10.5013100.350.3147.698.0198.560.35
20.5006100.250.4148.49&54
30.5003100.150.7147.898.01
40.5012100.3250.9347.29&86
50.5015100.3250.2346.098.72
60.5021100.5250.3345.498.46
70.5004100.1500.2593.69&睨
80.5005100.1500.5592.29&60
90.5001100.1500593.79&93
异丙醇10.5008050.849.89&0398.250.30
续表见下页
26食品与药品Food and Drug2021年第23卷第1期
续表接上页
20.5016050.349.297.81
民以何食为天
30.5005050.749.798.03
40.50020250.4245.297.92
50.50030250.1246.19&40
60.50060250.0246.498.56
70.50190500.7492.598.36
80.50140500.2493.198.58
90.50070500.3492.998.52
乙睛10.50260 4.4 4.4100.0098.350.81
20.50140 4.7 4.697.87
30.50130 4.1 4.097.56
40.5002020.219.998.51
50.5011020.520.198.05
60.5015020.319.897.54
70.5007041.340.999.03
80.5006041.140.59&54
90.5012041.640.898.08
二氯甲烷10.50090 6.2 6.198.3998.250.65
20.50100 6.1 5.996.72
30.50060 6.8 6.79&53
40.5017030.730.398.70
50.5022030.630.198.37
60.5003030.129.598.01
70.5008060.559.598.35
80.5025060.859.798.19
90.5014060.459.899.01
正己烷10.50020 3.5 3.497.149&450.86
20.50120 3.8 3.797.37
30.50070 3.2 3.2100.00
40.5016015.515.29&06
50.5021015.915.798.74
60.5015015.315.19&69
70.5001030.430.098.68
80.5004030.329.998.68
90.5018030.630.29&69
乙酸乙酯10.5005050.349.899.0198.520.37
20.5029050.749.79&03
30.5023050.849.898.03
40.50130250.1247.19&80
50.50100250.6246.998.52
60.50020250.3245.898.20
续表见下页
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