ChIP实验精讲(做科研的必看)

染质免疫共沉淀（ChIP）

概述

ChIP：chromatinimmunoprecipitation assay，染质免疫沉淀技术。

研究蛋白质与DNA在染质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。

ChIP是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法

原理

在活细胞状态下固定“蛋白质-DNA”复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。

ChIP应用

1、检测体内反式因子与DNA的动态作用，研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系；

2、CHIP与基因芯片相结合建立的CHIP-on-ChIP方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选；

3周宝宽、CHIP与体内足迹法相结合，用于寻反式因子的体内结合位点；

4、RNA-CHIP用于研究RNA在基因表达调控中的作用。

试验流程一、交联染质免疫沉淀技术

1. 细胞甲醛交联和收集

注意事项： ①需要优化甲醛使蛋白质和DNA交联的时间。

②交联的时间很关键。交联的时间一般为2-30 分钟。

③交联过度会降低抗原的可结合性和超声的效率，也会被遮盖抗原的表位。

④甘氨酸可抑制甲醛的作用，终止交联反应。

1.1 取 1直径10cm培养皿的细胞。加入甲醛至终浓度为0.75%（V/V），使蛋白和DNA 三界演义交联。

1.2 室温下，轻摇10 分钟。

1.3 加入甘氨酸至终浓度为125 mM，室温下放置5 分钟，以终止交联。

1.4 吸去培养基，用冰冷PBS 洗细胞2 次。

1.5 使用细胞刮刀，加入练习模式5ml 冰冷PBS，huvec细胞 dac基因刮下细胞，收集至一个50 ml 离心管中。

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本文发布于:2024-09-22 01:01:30，感谢您对本站的认可！

标签：基因结合染色质表达细胞因子用于作用

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