(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010124552.9
(22)申请日 2020.02.27
(71)申请人 四川新健康成生物股份有限公司
地址 610000 四川省成都市高新区天欣路
101号
(72)发明人 林源 蒋明君 李学锐 周松
(74)专利代理机构 成都行之专利代理事务所
(普通合伙) 51220
代理人 胡晓丽
(51)Int.Cl.
G01N 33/74(2006.01)
G01N 33/558(2006.01)
G01N 33/543(2006.01)
G01N 21/64(2006.01)
(54)发明名称
光层析检测试纸条
(57)摘要
本发明公开了一种提高层析线性范围的方
线于层析膜上作为检测线，
并在荧光层析检测试纸条的标记物垫上喷涂抗体-荧光微球偶联物。 通过对HCG荧光层析进行改进，可以使线性范围
达到1-200000mIU，不需稀释，测试更加快速，准
确。本发明还公开一种β-HCG荧光层析检测试纸
条及其制备方法。权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 111323605 A 2020.06.23
C N 111323605
A
1.一种提高层析线性范围的方法，其特征在于，将抗原划线于层析膜(4)上作为质控线
(7)，抗体划线于层析膜(4)上作为检测线(6)。
2.根据权利要求1所述的一种提高层析线性范围的方法，其特征在于，在荧光层析检测试纸条的标记物垫(3)上喷涂抗体-荧光微球偶联物。
3.一种β-HCG荧光层析检测试纸条，包括基板(1)和基板(1)上依次衔接的样品垫(2)、标记物垫(3)、层析膜(4)和吸水垫(5)，其特征在于，所述结合物垫上喷涂有HCG抗体-荧光微球偶联物，层析膜(4)上划有检测线(6)和质控线(7)，检测线(6)上为HCG抗体，质控线(7)上为HCG抗原。
4.根据权利要求3所述的一种β-HCG荧光层析检测试纸条，其特征在于，所述标记物垫
(3)为玻纤垫，所述层析膜(4)为硝酸纤维素膜。
5.如权利要求3或4所述的一种β-HCG荧光层析检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将HCG抗体-荧光微球偶联物喷涂在标记物垫(3)上；
磷酸盐缓冲液(2)将β-HCG抗体稀释液划线于硝酸纤维素膜上靠近玻纤垫一侧作为检测线(6)；
(3)将β-HCG抗原稀释液划线于硝酸纤维素膜上靠近吸水垫(5)一侧作为质控线(7)。
6.根据权利要求5所述的一种β-HCG荧光层析检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，标记物垫(3)的喷涂方式为：将处理液喷涂于玻纤垫一侧，喷量4ul/cm，然后将β-HCG抗体-荧光微球偶联物喷涂于玻纤垫另一侧，烘干；所述处理液组分包含阻断剂10％，蔗糖2％，吐温20 0.5％，抗红细胞抗体1％，50mM PBS ph
7.2。
7.根据权利要求5所述的一种β-HCG荧光层析检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，β-HCG抗体采用稀释液稀释至1mg/mL，划膜量1ul/cm，然后烘干。
8.根据权利要求5所述的一种β-HCG荧光层析检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，β-HCG抗原采用稀释液稀释至0.5mg/mL，划膜量1ul/cm，然后烘干。
9.根据权利要求5所述的一种β-HCG荧光层析检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，质控线(7)划线后，将样品垫(2)、标记物垫(3)、层析膜(4)和吸水垫(5)粘贴在基板(1)上，裁切、封装。
权 利 要 求 书1/1页CN 111323605 A
一种提高层析线性范围的方法及β-HCG荧光层析检测试纸条
技术领域
[0001]本发明涉及荧光免疫层析技术领域，具体涉及一种提高层析线性范围的方法及β-HCG荧光层析检测试纸条。
背景技术
[0002]荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术。该技术以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于连接垫，通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。对于带有多个抗原决定簇的大
任湘
分子抗原(蛋白、病毒、致病菌等)，通常采用“三明治”型双抗夹心免疫层析方法，即待测物在流动相作用下先与荧光标记抗体结合，当到达检测线时再与包被抗体结合形成双抗夹心的“三明治”型。
[0003]HCG是胎盘合体滋养辰细胞所分泌的一种糖蛋白激素，它的主要功能是：维持黄体及降低母体淋巴细胞的活动，防止对胎儿的排斥反应。HCG结构中包括α，β两个亚基，α亚基与LH，FSH，TSH近似，尤其是与LH有较大的免疫交叉反应，β链为其独有，β亚基被用来制备特异性抗体测定中的HCG，专名为β-HCG。主要临床意义：a，妊娠诊断；b，先兆流产动态观察，判别预后良好；c，可作为绒癌、恶葡术后疗效观察的指标，应连续检测直至转阴为止。[0004]β-HCG作为妊娠指标，孕妇在停经35-45天即可测出，直至分娩后4天消失。在妊娠12周内的HCG水平增长速度非常快，不像其他人体激素那样恒定。HCG的浓度每时每刻都在增加，胚胎正常发育时，HCG二次相隔48小时的定量检测，第二次增高幅度应不小于第一次的66％，在孕期9-12周时浓度达到最高峰，一般在100000-200000mIU/mL。
[0005]大多HCG检测(包括发光，酶免，荧光/胶体金层析)线性范围上限在10000-50000mIU，对于孕12周的样本需要稀释测定，一方面增加了检验科工作量，一方面因为基质效应的不同会有测试不准的风险。
发明内容
[0006]为了解决上述技术问题，本发明公开一种提高层析线性范围的方法及β-HCG荧光层析检测试纸条。通过对HCG荧光层析进行改进，可以使线性范围达到1-200000mIU，不需稀释，测试更加快速，准确。
[0007]本发明通过下述技术方案实现：
[0008]一种提高层析线性范围的方法，将抗原划线于层析膜上作为质控线，抗体划线于层析膜上作为检测线。
[0009]进一步的，在荧光层析检测试纸条的标记物垫上喷涂抗体-荧光微球偶联物。[0010]一种β-HCG荧光层析检测试纸条，包括基板和基板上依次衔接的样品垫、标记物垫、层析膜和吸水垫，所述结合物垫上喷涂有HCG抗体-荧光微球偶联物，层析膜上划有检测线和质控线，检测线上为HCG抗体，质控线上为HCG抗原。
测癌试纸[0011]所述标记物垫为玻纤垫，所述层析膜为硝酸纤维素膜。
扣B标准手势
[0012]本发明将β-HCG抗原替代传统的抗体作为质控线，HCG抗原作为质控线划在HCG抗体即检测线后面，在检测HCG高浓度样本时，HCG抗体在T线已经饱和，质控线上的抗原同样本中的抗原共同争夺HCG抗体-荧光微球偶联物，造成随样本浓度升高，质控线荧光信号降低的现象，而T线与质控线的
比值就随样本浓度的升高而升高，以此实现了高浓度样本的测定，提高了HCG测试的线性范围，高浓度样本不需多次稀释，测试更加快速，准确。[0013]一种β-HCG荧光层析检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：
[0014](1)将HCG抗体-荧光微球偶联物喷涂在标记物垫上；
[0015](2)将β-HCG抗体稀释液划线于硝酸纤维素膜上靠近玻纤垫一侧作为检测线；[0016](3)将β-HCG抗原稀释液划线于硝酸纤维素膜上靠近吸水垫一侧作为质控线。[0017]进一步的，步骤(1)中，标记物垫的喷涂方式为：将处理液喷涂于玻纤垫一侧，喷量4ul/cm，然后将β-HCG抗体-荧光微球偶联物喷涂于玻纤垫另一侧，烘干；所述处理液组分包含阻断剂10％，蔗糖2％，吐温20 0.5％，抗红细胞抗体1％，50mM PBS ph 7.2。
[0018]进一步的，步骤(2)中，β-HCG抗体采用稀释液稀释至1mg/mL，划膜量1ul/cm，然后烘干。
[0019]进一步的，步骤(3)中，β-HCG抗原采用稀释液稀释至0.5mg/mL，划膜量1ul/cm，然后烘干。
烟气烟碱量[0020]进一步的，步骤(3)中，质控线划线后，将样品垫、标记物垫、层析膜和吸水垫粘贴在基板上，裁切、封装。
[0021]进一步的，β-HCG抗体-荧光微球偶联物中的抗体采用抗β-HCG单克隆抗体1，检测线所用β-HC
G抗体为抗β-HCG单克隆抗体2。
[0022]本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
[0023]本发明一种β-HCG荧光层析检测试纸条，将β-HCG抗原替代传统的抗体作为质控线，HCG抗原作为质控线划在HCG抗体即检测线后面，在检测HCG高浓度样本时，HCG抗体在T 线已经饱和，质控线上的抗原同样本中的抗原共同争夺HCG抗体-荧光微球偶联物，造成随样本浓度升高，质控线荧光信号降低的现象，而T线与质控线的比值就随样本浓度的升高而升高，以此实现了高浓度样本的测定，提高了HCG测试的线性范围，高浓度样本不需多次稀释，测试更加快速，准确。
附图说明
[0024]此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本发明实施例的限定。在附图中：
[0025]图1为本发明荧光层析检测试纸条示意图。
[0026]图2为本发明β-HCG检测结果示意图。
[0027]附图中标记及对应的零部件名称：
[0028]1-基板，2-样品垫，3-标记物垫，4-层析膜，5-吸水垫，6-检测线，7-质控线。
具体实施方式
[0029]为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作
为对本发明的限定。
[0030]实施例1
[0031]如图1所示，本发明一种β-HCG荧光层析检测试纸条，包括基板1和基板1上依次衔接的样品垫2、标记物垫3、层析膜4和吸水垫5，所述结合物垫上喷涂有HCG抗体-荧光微球偶联物，层析膜4上划有检测线6和质控线7，检测线6上为HCG抗体，质控线7上为HCG抗原。[0032]所述标记物垫3为玻纤垫，所述层析膜4为硝酸纤维素膜。
[0033]实施例2
[0034]一种β-HCG荧光层析检测试纸条的制备方法，包括以下步骤：
[0035]1、抗体-荧光微球偶联物的制备
[0036] a.取出500ul荧光微球(1％浓度W/V，绿荧光-激发475nm-发射525nM)放入离心管中。
[0037] b.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min，使微球沉降，去除上清。
[0038] c.加入500ul偶联缓冲液(50mM MES ph6.0)，混匀。
[0039] d.加入20ul EDC溶液(200mM)，20ul sulfo-NHS溶液(200mM)，混匀，并在转盘混匀器上孵育30min。
[0040] e.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min，使微球沉降，去除上清。
[0041] f.加入500ul偶联缓冲液(50mM MES ph6.0)，混匀后加入0.1mg抗β-HCG单克隆抗体，混匀，室温下用转盘混匀器孵育1h。
[0042]g.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min，使微球沉降，去除上清。
[0043]h.加入封闭液(1％BSA水溶液)，混匀，室温下用转盘混匀器孵育1h。
[0044]i.离心(根据不同的粒径选择12000rpm-20000rpm转速)10min，使微球沉降，去除上清。
[0045]j.加入500ul保存液(0.5％BSA，2％蔗糖，Tirs-HCl ph 8.0)，混匀。
[0046]2、荧光层析检测试纸条的制备
试题与研究[0047] 2.1玻纤垫的制备：将玻纤裁切为3*3cm的规格，使用喷金仪将处理液(阻断剂10％，蔗糖2％，吐温20 0.5％，抗红细胞抗体1％，50mM PBS ph 7.2)喷涂于玻纤一侧，喷量4ul/cm；将β-HCG抗体-荧光微球偶联物喷涂于玻纤一侧；45℃烘干16h。
[0048] 2.2硝酸纤维素膜的制备：将另一种β-HCG抗体(β-HCG单克隆抗体2)，使用稀释液(2％蔗糖，50mM PBS ph7.2)稀释至1mg/mL，划线于纤维素膜上靠近玻纤垫一侧作为检测线；将β-HCG抗原使用稀释液(2％蔗糖，50mM PBS ph7.2)稀释至0.5mg/mL，划线于纤维素膜上靠近吸水垫一侧作为质控线；划膜量1ul/cm，45℃烘干16h。
[0049] 2.3基板采用PVC板，将制备好的玻纤垫、硝酸纤维素膜、样品垫和吸水垫粘贴在PVC板上，且样品垫2、玻纤垫、硝酸纤维素膜和吸水垫5相接部分重合粘贴，重叠长度为2mm，组装并斩切后成为4mm宽的试纸条，装入卡壳，封装在铝箔袋中。
[0050]测试：
[0051]将不同β-HCG浓度的样本和实施例2的β-HCG检测试纸条恢复至室温，进行检测，具
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议