潘庆军;朱学芝
【摘 要】目的 评估呼吸道合胞病毒(RSV)荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度和特异性等检测效能.方法 以培养的RSV和其他呼吸道病原体以及280例具有上呼吸道感染症状的患者作为标本来源.分别anjiang采用RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条和胶体金快速检测试纸条检测同一份标本,分析两种检测试纸条的检测效能.结果 荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度高于胶体金快速检测试纸条；对甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道腺病毒和肺炎支原体无特异性反应.结论 RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条在检测性能上高于胶体金快速检测试纸条.%Objective To evaluate the sensitivity and specificity of respiratory tract syncytial virus (RSV) fluorescent nanoparticles rapid detection test strip and other detection performance.Methods The specimen including RSV,other respiratory pathogens and 280 cases of patients with symptoms of upper respiratory tract infection were used as samples.The RSV fluorescent nanoparticles rapid detection test strip and colloidal gold rapid detection test strips were used to detect the same samples.Results The sensitivity of f luorescent nanoparticles rapid detection test strip were higher than colloidal gold rapid test strip,and there were no specific reaction with influenza A virus,influenza B virus,parainfluenza virus,respiratory adenovirus and mycoplasma pneumoniae.Conclusion The detection performance of RSV fluorescent nanoparticles rapid detection test strips are better than colloidal gold rapid detection test strip.
【期刊名称】《标记免疫分析与临床》
【年(卷),期】2013(020)004
【总页数】4页(P253-256)
【关键词】呼吸道合胞病毒;荧光纳米颗粒快速检测试纸条;胶体金快速检测试纸条;灵敏度;特异性
【作 者】潘庆军;朱学芝
【作者单位】广东医学院附属医院,广东湛江524001;广东粤海饲料集团有限公司,广东湛江524017
【正文语种】中 文
【中图分类】R373
测癌试纸呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)是一种约120～300nm的呼吸道RNA病毒，属副粘病毒科肺炎属，有球状和丝状两种［1－2］。RSV 是引发下呼吸道感染最常见、最重要的病原体之一，最易感染婴幼儿和免疫力低下者［3－5］。由于其对细胞具有融合作用，故命名为呼吸道合胞病毒。准确诊断RSV感染是控制感染和避免滥用抗生素的关键。RSV感染后诱发的临床症状与支原体肺炎、副流感病毒等其他病毒性肺炎相似，较难区别，因此及时、准确地检测RSV，对疾病的预防控制与具有重要意义。本研究率先评估RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度和特异性等检测效能。
资料与方法
1 标本
呼吸道合胞病毒(Long株)、流感病毒(HlN1亚型、H3N2亚型、乙型)、副流感病毒(I型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)和肺炎支原体(FH株、临床分离株)，以及人喉癌细胞系(H
ep－2细胞)由本室保存。
2 对象
绿壳蛋鸡养殖前景选取2006年9月至2007年5月本院住院及门诊的呼吸道疾病(肺部感染、上呼吸道感染、毛细支气管炎)患者280例，其中男性172例，女性108例，平均年龄32.6±17.4岁，用鼻拭子刮取法采集患者鼻咽部分泌物作为标本。
3 试剂
RSV病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条购自广州博特生物工程有限责任公司，BINAX NOW RSV胶体金快速检测试纸条购自美国Binax公司。
4 方法
4.1 检测原理(简写)
荧光纳米颗粒快速检测试纸条检测的基本原理:在样品垫或加样孔中滴加样品，样品溶解聚酯纤维膜上喷涂的荧光微球抗体，通过毛细作用在纤维膜上向前层析移动;样品中可与荧光
微球标记抗体相互作用;反应溶液经过NC膜时，继续与上面包被的抗体或抗原发生作用结合;在激发光源的激发下，富集在检测T线的荧光微球可发射出目测可见的荧光条带;无论样品中是否含有待检抗原或抗体，荧光微球均会移行至质控线(C线)，与其包被的抗抗体结合(图1)。
楚辞 招魂4.2 灵敏度评价
超声波测距仪的设计
把经Hep－2细胞培养的RSV病毒进行2倍倍比稀释，分别用两种试剂检测。具体为:吸取病毒培养液3滴(或150μL)分别滴于两种试剂的检测卡加样孔中，15分钟内观察结果。胶体金快速检测试纸条在检测区和对照区各出现一条红带为阳性，仅在对照区出现一条红带为阴性。荧光纳米颗粒快速检测试纸条用常见的紫外灯光照射或专用设备照射后，在检测区和对照区各出现一条绿条带为阳性，仅在对照区出现一条绿条带为阴性。
4.3 特异性评价
分别用2种试剂对流感病毒(H1N1亚型、H3N2亚型、乙型)、副流感病毒(I型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(III型、Ⅶ型)的细胞培养产物和肺炎支原体(FH株，临床分离株)的培养物进行测试。结果判定同4.1。
4.4 临床标本检测
标本采集:用鼻拭子采集患者鼻孔中分泌物，将鼻拭子在稀释液中充分搅拌、挤压溶于稀释液中作为待检样品。然后用细管吸取搅拌液3滴(或150μl)分别滴于两种试剂盒的检测卡加样孔中。结果判定同 4.1。
5 统计学方法
2019理论韩国理论中文采用SPSS15.0软件进行分析，利用四格表分析受试产品的敏感度和特异度。
结 果
1 灵敏度评价
检测结果发现，在RSV培养物稀释到1/28时，胶体金快速检测试纸条为阴性，而荧光纳米颗粒快速检测试纸条仍可检测到。荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度是胶体金快速检测试纸条的4倍，见表1。
表1 两种试剂检测不同稀释倍数的RSV细胞培养物结果比较方法稀释倍数1/2 1/22 1/23 1/2
4 1/25 1/26 1/27 1/28 1/29 1/210–––荧光纳米颗粒法 + + + + + + + + +胶体金法 + + + + + + +–
2 特异性评价
检测结果发现，两种检测试剂与流感病毒(HlNl亚型、H3N2亚型、乙型)、副流感病毒(I型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)和肺炎支原体等均无交叉反应，见表2。
表2 两种试剂检测其他呼吸道病原体结果比较方法流感病毒 副流感病毒 呼吸道腺病毒 肺炎支原体H1N1 H3N2 乙型 I型 Ⅲ型 III型 Ⅶ型 FH 株 分离株胶体金法 – – – – – – – – –荧光纳米颗粒法 – – – – – – – – –
3 临床标本检测
如以荧光纳米颗粒法试剂作为受试产品，胶体金法试剂作为参比产品，对于同份标本分别应用两种试剂进行检测。受试产品灵敏度为97.7%，特异性为95.36%。见表3。
表3 两种试剂检测临床标本结果的比较受试产品(荧光纳米颗粒法)参比产品(胶体金法)合计阳性 阴性阳性84 9 93阴性 2 185 187合计86 194 280
讨 论
RSV是引发下呼吸道感染的重要病原体之一，最易感染婴幼儿和免疫力低下者［6－7］。由于不同病原体引起的呼吸道感染症状相似，所以确诊RSV感染除根据临床症状和体征外，更要有赖于实验室检测。
RSV感染的金标准是用适宜宿主细胞培养标本后进行标准血清鉴定，但是，该方法常常需要3～7天时间，且RSV感染力在培养前容易受损失，而影响培养的鉴定结果，因此，难以满足临床应用的需要。
目前，RSV的检测方法有免疫荧光法、病毒分离培养法和血清学检测等，但这些检测方法操作复杂，需时较长［8］。胶体金免疫层析技术是以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的检测技术，具有简单、快速、无需特殊设备和专业人员等优点，在医学、食品安全等多个领域得到了广泛的应用［9］。该方法的不足之处是灵敏度较低，对感染初期或较低滴度的RSV感染可能造成漏检。因此，开发能显著提高其灵敏度的胶体金标记替代标将有望解决该缺陷。
荧光纳米颗粒快速检测技术作为一种新兴检测技术，其基本原理类似胶体金，仅以荧光微球代替胶体金颗粒，反应完毕后，用常见的紫外灯光照射或专用设备照射后，肉眼可见反应条带。基于经过激发的荧光纳米颗粒可释放高分辨率的肉眼可识别的光谱，其灵敏度可能优于胶体金免疫层析技术。目前，荧光纳米颗粒快速检测技术相关产品大多处于研究阶段，上市销售的极少，但仍以其高灵敏度受到市场的期许，是一种方便实用的新型测试方法，配合常见的紫外灯光照射或专用设备照射后，肉眼可以实现对病原体、激素、抗生素等的现场检测或定量分析。目前国内外用于RSV感染的胶体金快速检测试纸条在逐年增加，而RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条仅有广州博特生物工程有限责任公司生产。
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