l型匹配使用毛细管电泳检测单克隆免疫球蛋白产生假阴性结果：一项前瞻性研究Xavier Bossuyt* and Godelieve Marie¨n (Laboratory Medicine, Immunology, University Hospital Leuven,Herestraat 49, B-3000 Leuven, Belgium; * author for correspondence:fax
00-32-16-34-7931, e-mail **************************.ac.be)
过去5年以来,使用熔化硅的毛细管电泳(CZE)被应用到临床实验室进行常规血清蛋白电泳不断地增加(1). 多通道,自动毛细管电泳仪Paragon CZE 2000 (七通道，Beckman Coulter)作为耗时的手工操作的替代品呈现出强大的吸引力。CZE已经被证实可应用于分析血清蛋白和单克隆成分（2，3）。我们结论是Paragon CZE2000系统检测单克隆成分的敏感性（93%）超过醋酸纤维电泳（74%）和琼脂糖凝胶电泳（86%）。在一项前瞻性研究中，katzman et al(5)报道七通道的毛细管电泳和琼脂糖凝胶电泳的敏感性分别为95%和91%。与琼脂糖凝胶电泳相比，CZE能够检测出更多的隐藏在琼脂糖凝胶中，与转铁蛋白或C3(6)共同迁移的低浓度IgA成分或轻链。CZE漏检的典型异常蛋白是浓度非常低的单克隆成分，同时琼脂糖凝胶电泳也会漏检，而免疫固定电泳却能够检测出来。 CZE检测单克隆成分的问题曾经被描述（7,8）。使用单通道Beckman P/ACE 毛细管电泳，其只有一个毛细管并且缓冲液与Paragon CZE 2000不同，Jenkins 和Guerin(7)进行了一项关于5500个样品的前瞻性研究，在这一研究中他们比较了CZE与琼脂糖电泳检测单克隆免疫球蛋白。作者证实有六种异常蛋白CZE不能正确分离。对于琼脂糖电泳，所有的这些异常蛋白都位于慢γ区,为等电点PI＞8.5 的异常IgG蛋白和PI＞6.9的异常IgM蛋白。当离子强度和缓冲液PH增加，CZE可检测出所有的异常蛋白。Henskens et al.（8）报道使用P/ACE系统漏检高浓度20g/单克隆IgM成分（相当靠近琼脂糖凝胶的阴极）。通过改变离子强度和缓冲液的PH可以检出此种异常蛋白。
在本研究中，我们前瞻性评价Paragon CZE仪器（Beckman Coulter）检测异常血清蛋白。CZE检测同时作免疫固定检测，对源自1692不同个体提交到我们医院实验室用于筛查异常蛋白存在或重新评价已知异常蛋白的2629份标本进行检测。免疫固定使用Hydrasys 仪器（Sebia）按照Hydrasys 4人份免疫固定说明书进行操作。免疫固定表明在1692病人中有明确异常蛋白存在是481个病人：
IgG型异常蛋白（315例，65％）；IgA型异常蛋白（74例，15.4％）；IgM型异常蛋白（7
1例，14.8％）；IgD型异常蛋白（1例）和轻链病（20例，4.1％）。其中有14例，存在二种异常蛋白（IgA伴有IgM或IgG有9例，IgG伴有IgM有5例）。
CZE漏检481例中的24例(5%)免疫固定表明异常蛋白存在的病例。CZE检测单克隆蛋白的敏感性是95％与katzman et al（5）报告一致。
最常见漏检的异常蛋白是低浓度的；CZE漏检了IgD型异常蛋白。使用CZE 在检测免疫固定揭示为游离轻链的样品（5个），低浓度单克隆IgA型蛋白，（总IgA浓度＜3.2g/L;6个样品），低浓度单克隆IgM型异常蛋白（总IgM浓度＜2.1g/L;5个样品），和低浓度IgG型异常蛋白（3个样品）没有发现异常。所有被CZE漏检的IgA型异常蛋白都迁移在β区并且隐藏在转铁蛋白或C3峰内，而低浓度IgM型异常蛋白除了一例与C3一起移动外，则迁移至γ区。低浓度位于β和γ区的IgG型异常蛋白CZE亦检测不出来。
另外三个样品，异常蛋白位于慢γ区（7，8），在CZE上不能正确分离。其中一个样品CZE结果图是压缩的，并报出检测错误（图，1 C）。高解析琼脂糖电泳(Hydrasys)检测此样品为高浓度的异常蛋白（22g/L）迁移至慢γ区（图，1A）。等电聚焦检测表明为PI＞8.5的单克隆IgG型蛋白。我们推测这个问题与单克隆蛋白较高等电点和缓冲液PH值及离子强度有
关，就如前面提到的（7，8）。分析同一样品使用CEofix TM高解析毛细管电泳试剂盒（Analis）按照试剂说明书在P/ACE 5000（Beckman Coulter）系统上操作可检测出此单克隆蛋白。第二个样品，即低浓度IgG型异常蛋白在琼脂糖凝胶上迁移至慢γ区，并给出正常CZE电泳图（数据没有显示）。CZE也不能正确分离IgM型异常蛋白（总IgM浓度，5.6g/L）。此单克隆蛋白可被琼脂糖凝胶电泳和CEofix TM高解析毛细管电泳检测出（数据没有显示）。此样品的等电聚焦表明PI在～6－～8.5处有几条带出现。这三个病例说明使用Paragon CZE2000 系统可能漏检一些异常蛋白，即那些迁移至慢γ区，以前曾被Henskens et al(8)和Jenkins 及Guerin关于P/ACE系统的CZE方法文章中描述。我们认为改变Paragon 2000系统的缓冲液PH和离子强度能够使这一系统正确分离高等电点的单克隆蛋白。
图1，二个IgG单克隆蛋白(A和B)的琼脂糖凝胶电泳的扫描图和(C和D)毛细管电泳图
A和C为同一份样品，B和D为同一份样品
最后，一个样品，CZE完全没有检测出高浓度异常蛋白的存在。CZE显示正常的电泳图（图，1D）,而琼脂糖电泳揭示在γ带中区有明确峰（18g/L,图1B）。免疫固定证实为IgG λ带。这一异常蛋白不同于其它的原因为（a）它迁移至γ中区而不是在琼脂糖凝胶的慢γ区，并且（b）它的等电点PI（用等电聚焦方法）是～7。另外，分析同一样品使用CEofix TM高解析毛细管电泳试剂在P/ACE5000上也没有检测出此单克隆成分。样品中没有冷球蛋白存在;脂蛋白电泳显示正常图谱，排除脂蛋白复合物存在可能干扰CZE的情况。CZE漏检此蛋白的原因不清楚。可能与这种特殊蛋白的光吸收特性有关。CZE使用吸光度进行检测，而传统的方法采用的是染料结合定性蛋白。
2013苏迪曼杯总结，此前瞻性研究表明与免疫固定相比，CZE的敏感性对于检测单克隆蛋白是95％，验证了早先的报告（5）。CZE漏检的单克隆蛋白典型是低浓度异常蛋白仅能够被免疫固定检测出。我们也要说明，尽管不普遍，Paragon CZE也不能正确分离高浓度单克隆成分。这些单克隆成分的典型有高等电点并且迁移至琼脂
糖凝胶慢γ区。另外，我们第一次发现CZE也不能检测出高浓度等电点为～7，且迁移至γ中区的单克隆成分。未能检测出的原因不清楚，与冷球蛋白或脂蛋白的复合物存在无关。就
这些检测结果，我们对于第一次提交给我们实验室要求检测异常蛋白的所有样品进行CZE检测，并且同时进行免疫固定检测。
我们感谢Guido Vranken an Anja DeSaeleer有益讨论和在P/ACE仪器上进行检测分析。我们亦感谢Z. Zaman关于等电聚焦检测方面的帮助。
参考文献：
1. Blessum C, Jeppsson JO, Aguzzi F, Bernon H, Bienvenu J. Capillary electrophoresis:principles and practice in clinical laboratory. Ann Biol Clin
(Paris)1999;57:643–57.意见领袖
异常蛋2. Bienvenu J, Graziani MS, Arpin F, Bernon H, Blessum C, Marchetti C, et al.Multicenter evaluation of the Paragon CZE 2000 capillary zone electrophoresissystem for serum protein electrophoresis and monoclonal componenttyping. Clin Chem 1998;44:599–605.
dirac
3. Bossuyt X, Schiettekatte G, Bogaerts A, Blanckaert N. Serum protein electrophoresis by CZE 2000 clinical capillary electrophoresis system. Clin Chem1998;44:749–59.
4. Bossuyt X, Bogaerts A, Schiettekatte G, Blanckaert N. Detection and classification of paraproteins by capillary immunofixation/subtraction. Clin Chem1998;44:760–4.
panel5. Katzmann JA, Clark R, Sanders E, Landers JP, Kyle RA. Prospective study of serum protein capillary zone electrophoresis and immunotyping of monoclonal proteins by immunosubtraction. Am J Clin Pathol 1998;110:503–9.
6. Clark R, Katzmann JA, Kyle RA, Fleisher M, Landers JP. Differential diagnosis of gammopathies by capillary electrophoresis and immunosubtraction: analysis of serum samples problematic by agarose gel electrophoresis. Electrophoresis 1998;19:2479–84.
7. Jenkins MA, Guerin MD. Optimization of serum protein separation by capillary electrophoresis [Letter]. Clin Chem 1996;42:1886.
8. Henskens Y, de Winter J, Pekelharing M, Ponjee G. Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary el
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议