研究
一
6
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改良四胺银染法用于卡氏
肺孢子虫诊断的研究
陈锡慰
南京医学院寄生虫学教研室南京210028
争
提要在Grocott改良的果氏四胺银方法中，分别以5过碘酸钠与5铬酸作氧化剂，对感
染卡氏肺孢子虫的小鼠肺涂片，大鼠及病人的肺切片进行染.小鼠肺豫片的氧化时间分剐为5. 15与6Omen，温度为20”CI银漫时间90rain，温度60℃.在较短氧化时间即15min以下时，卡氏肺孢
子虫包囊显示捩褐或撵褐.部分包囊内清晰可见一对括号状结构I但氧化时间较长时，包囊呈 黑且显示受损.在同一批次小鼠肺撩片氧化时间为5min时，过碘酸
钠氧化较之铬酸显示较多的
古括号状结扮的包囊.在过碘酸钠氧化的太鼠或病人的肺切片中，也可见到该结构.实验结果表明
52se以过碘酸钠作氧化剂进行银染反应优于铬酸.且可省略亚硫酸氢钠处理步骤，这将有利于临床应
用.
关键词卡氏肺孢子虫诊断Grocott{击四壁韫染法.’—’.
～一’._—’—一
卡氏肺孢子虫是一种机会性致病微生教育与社会的关系
物，多见于免疫缺陷宿主，临床引起卡氏肺孢
子虫性肺炎.近年已成为艾滋病最常见的并
发症及死因[“，由于卡氏肺孢子虫肺炎临床
缺乏特异的体征与症状，因此，它的确诊戗赖
于病原诊断.在诸多的病原染方法中，作为
定性诊断，以Grocott改良果氏四胺银技术
较受欢迎.该法可显示卡氏肺孢子虫包囊
的一对特征性括号状结构，系与真菌鉴别的
特征.但Grocott改良法必须使用铬酸作氧
独眼 喙鼻
化剂，且结果不易稳定，因此，近年来已有采
用其它氧化剂的报告本研究选用过碘酸钠
替代铬酸氧化，进行四胺银染，现报告结果
如下.
对症1材料与方法
l-1卡氏肺孢子虫感染标本的制备选择
体重约为2O0g的Wistar雄性大鼠及lOg左右的昆明种小鼠，经腹部皮下注射醋酸可的松，每周二次，丈鼠每次25rag；小鼠2.5rag,
连续8～9周.为了防止细菌感染，在每升饲喂饮水内加入四环素500--1000mg.自第8 周起，对消瘦，蓬毛并伴有呼吸困难的动物, 处死后取两肺涂片作姬氏染，对查见卡氏肺孢子虫成熟包囊(含8个囊内小体)的鼠肺，选用同一小鼠的肺组织涂片，自然干燥后甲醇固定.大鼠肺组织拄常规制备石蜡切片. 为观察病人肺组织的染效果，对卡氏肺孢子虫感染者的肺石蜡切片标本进行了同样染，标本由日本京都府立医科大学提供.
1.2改良四胺银染试剂的配制所用主
要试剂有;5过碘酸铺,5铬酸,1亚硫酸
氢钠,0.1盼氯化金,2硫代硫酸钠及六环甲
基四胺硝酸银(简称四胺银)溶液.后者的配制方法为：将5硝酸银5ml加入3的环六
亚甲基四胺银溶液100ml内，产生白沉淀, 摇至透明，即为原液.其使用液内含原液
25ml,5硼砂2ml及蒸馏水25ml.上述试剂均为国产
1.3染步骤
1.3.1将小鼠肺涂片分别置入5过碘酸
冉与5铬酸中氧化5,15与60rain，温度为
2O℃.氧化后的标本均以流水冲洗数秒铬酸氧化的标本随即进入1.3.2及1.3.3步; 过碘酸钠氧化的标本则略去1亚硫酸氢钠处理，直接进行四胺银染.大鼠肺切片与患者肺石蜡切片按常规方法脱蜡后，再以
100,90,80反7O乙醇逐级脱去二甲
苯，水冼”，过碘酸钠氧化5rain，后按涂
片相骤处理.
1.3.2置1亚硫酸氢钠溶液内lmin，自来
水冲洗后，蒸馏水洗涤3～4次
1.3.3置四胺银工作液内，在60℃孵箱内
约90min，至标本转为黄褐为止.流水，蒸馏水冲洗5min.痕迹学
1.3.40.1氯化金2~5min，蒸馏水洗4～
5次.
1.3.52硫代硫酸钠5min，流水至少洗
10mln.
1.3.6亮绿溶掖复染45s.
1.3.795,99,100乙醇逐级脱水.
1.3.8二甲苯透明，树胶封片.
2结果过碘酸钠或铬酸氧化的所有鼠肺
涂片中，卡氏肺孢子虫包囊呈圆形，卵圆形或不规则的多角形，囊壁为淡褐，可见1～2
条皱褶.红细胞为淡黄，其余背景呈淡绿.大鼠肺切片中的肺泡上皮细胞与肺中隔均为绿，与褐的包囊对比明显，容易识别.在不同氧化时间的小鼠肺涂片中，部分包囊内可见一对括号状结构，颜与囊壁相同; 计数100个包囊中含括号状结梅的包囊数有不同，无论是过碘酸钠还是以铬酸作氧化剂, 均¨控短时I司(1Stain以内)氧化显示含括号状结构的包囊数较多.氧化时间相同的小鼠肺椽I}，贝li以过碘酸钠氧化显示较多的含括号抓.构包囊(表1).
在砑定四胺银的银浸时间时.以氧化时
间长的包囊染较深.60rain的氧化处理，使包囊均染成黑，无法识别包囊内的括号状结构，且有些包囊的囊壁呈现厚薄不匀，囊内
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