分析与检测
黄曲霉毒素M1（AFM1）是含有二呋喃环的氧杂萘邻酮，是由黄曲霉毒素B1羟基化衍生而来[1]。AFM1对酸、光及热都很稳定，主要存在于动物的可食部分，比如蛋类、牛奶、肝脏等，其中以牛奶最为常见，目前已经成为乳制品质量安全风险评估的主要危害因素[2]。AFM1是目前发现的致癌性较强的毒素之一，它能够很大程度上破坏人及动物的肝脏组织，对人体产生肝肾等毒性，也存在致畸、致癌、致突变等风险，严重时会导致死亡[3]。本文参照JJF 1135-2005《化学分析测量不确定度评定》[4]、JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》[5]，JJG 646-2006《移液器检定规程》[6]和JJG 196-2006《常用玻璃量器检定规程》[7]，依据GB 5009.24-2016《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的测定》（第一法 同位素稀释液相谱-串联质谱法）[8]分析了牛奶中黄曲霉毒素M1含量检测的不确定度，以期为实验室质量控制提供有力的依据，同时也为其他真菌毒素类物质测定的不确定度分析提供参考。b1
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂Agilent 6470串联四极杆液相谱质谱仪（配制ESI源）；ME503T电
子天平（d=0.001 g）；黄曲霉毒素M1
标准品（10.0 μg/mL，纯度≥99%，
阿尔塔）；13C17-黄曲霉M1标准
品（BZYX483）（0.507 μg/mL，纯度≥
99.9%，ROMER）。
1.2 方法
1.2.1 标准溶液配制
准确移取黄曲霉毒素M11.00 mL
于10 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定
容，配制成1 µg/mL的标准储备溶液。
准确移取标准储备溶液1.00 mL至10 mL
2011安徽数学
容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得到
100.0 ng/mL的标准工作液。准确移
取13C17-黄曲霉毒素M11.00 mL，用乙
腈定容至10 mL，配制成50.7 ng/mL
的同位素内标工作液。
将标准储备液逐级稀释，得到质
量浓度为0.5、2.00、5.00、10.00、
20.00 ng/mL与25.00 ng/mL的黄曲
霉毒素M1标准工作液，其中内标的质
量浓度为0.507 ng/mL，供高效液相
谱-质谱联用仪测定。
1.2.2 样品前处理
按照GB 5009.24-2016[8]标准方
法，称取4 g混合均匀的试样（精确
至0.001 g）于50 mL离心管中，加入
10 μL13C17-AFM1内标溶液（50.7 ng/mL）振
荡混匀后静置30 min，加入10 mL甲
醇，涡旋3 min。置于4℃、5000 r/min
下离心10 min，经玻璃纤维滤纸，将
适量滤液转移至烧杯中，加40 mL
水；将恢复至室温的免疫亲和柱内的
液体弃掉，将上述样液移至50 mL
注射器筒中，控制下滴流速为1～
3 mL/min。待样液滴完后，往注射器
吲哚乙酸
筒内加入10 mL水，并抽干亲和柱，
加入2×2 mL乙腈（或甲醇）洗脱亲和
柱，收集全部洗脱液。在50 ℃下氮吹
至近干，用初始流动相定容至1.0 mL
溶解残留物，0.22 μm滤膜过滤，待测。
庄荣昌1.2.3 谱条件
谱柱：Agilent Eclipse Plus C18
RRHD，粒度1.8µm，50×2.1mm（内
径）；流速：0.3mL/min；柱温：35 ℃；
进样量：1µL；流动相：A—乙腈；B—
0.1%甲酸/水，梯度洗脱程序见表1。
重合林
表1 梯度洗脱程序表
图书馆学会时间/min A/%B/%
02080
34555
41000
51000
5.12080
1.2.4 质谱条件
电喷雾离子源（ESI）；正离子方
式检测，检测方式为多离子反应监测
（MRM）；定量分析的离子对为：黄
曲霉毒素M1母离子m/z 329.0，定量
液相谱串联质谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M
1不确定度分析
□ 王玉梅 刘 真 孙小杰 南京市食品药品监督检验院摘 要：针对液相谱串联质谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1含量的不确定度进行评定。基于GB 5009.24-2016《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的测定》（第一法）对牛奶中黄曲霉毒素M1含量进行定量分析，评估检测过程中产生不确定度的因素，并量化和合成不确定度分量。结果显示液相谱串联质谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M1含量的不确定度的结果为（1.181 5±0.05128）µg/kg（K=2）。分析影响因素表明，此检测方法中标准溶液及其工作液的制备是影响结果的最重要因素。
关键词：液相谱串联质谱法；牛奶；黄曲霉毒素M1；不确定度
May. 2020 CHINA FOOD SAFETY 107
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