黄曲霉毒素标准操作规程
1、目的
为了规范亲和柱净化样本中黄曲霉毒素的操作流程，特制订本操作规程。 2、范围
本标准适用于粮食、饲料、中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测。
3、检出限和定量限
4、职责
5、程序
5.1 原理
测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1 经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素B1 免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1，然后注入到分析仪器中用于检测。 5.2 溶液配制
5.2.1 70%甲醇-水溶液：取700mL甲醇，加入300ml去离子水混匀即可。
5.2.2 80%乙腈-水溶液：取800m乙腈，加入200ml去离子混匀即可。上海市公安局局长张学兵
5.2.3 1% 吐温-水溶液：取1ml 吐温-20，加入去离子水并定容至100ml。
飞信会员5.2.4 黄曲霉毒素混合标准工作液：用谱级甲醇将储备工作液分别稀释到50 ng/ml、20 ng/ml、10 ng/ml、5 ng/ml、1 ng/ml、0.5 ng/ml。
5.3 样品前处理
5.3 1 适用于玉米、小麦等粮食作物，花生及其制品，坚果、玉米油、花生油、饲料等样品
----25g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛），加入5g 氯化钠与125mL 70%
甲醇-水溶液混匀；
----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用
快速定性滤纸过滤，收集滤液；
----取10mL 滤液加入20mL 蒸馏水稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样
液；
----取15mL 上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数：1
5.3.2 适用于辣椒、花椒、黄豆酱等调料，面粉、麦芯粉、芝麻油及其它植物油、谷草等样品
----25g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛）加入
125mL 80%乙腈-水溶
液混匀；
----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用
快速定性滤纸过滤，收集滤液；
----取10mL 滤液加入40mL 蒸馏水稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样
液；
----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数：1
5.3.3 适用于中药（2015 版药典规定的19 味中药等）
----15g±0.01g 样品（固体样品需粉碎，并过2mm 分样筛）加入75mL 80%乙腈-水溶液
混匀；
----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡20min，用
快速定性滤纸过滤，收集滤液；
----取10mL 滤液加入40mL 1% 吐温-水溶液，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为
上样液；
----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数：1
5.3.4 适用茶叶样品：
----10g±0.01g 加入2g 氯化钠，加入纯甲醇溶液100mL，混匀；
-
---高速均质（≥10,000r/min）均质1min，或摇床（200r/min～
300r/min）剧烈振荡20min，
用快速滤纸过滤，收集滤液；
----取10mL 滤液加入40mL 蒸馏水稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样
液；
----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数：2
5.4 净化
b1
----取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上；(3mL 的免疫亲和柱去
掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与注射器固定后使用)
----将柱子与气控操作架上的注射器连接固定，取适量处理后的溶液上样；
橡皮婚姻-
---去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以1～2滴/秒的速度流出；
----待液体排干后，用10mL去离子水洗涤2次，流速2～3滴/秒；对于颜附着比较
深的样品，先用1% Tween-20 水溶液洗涤10mL，再用蒸馏水或去离子水洗涤10mL
流速2～3滴/秒；
----待液体排干后，上样1mL 甲醇，流速1 滴/秒，收集洗脱液并定容至
大熊猫一般产几只仔?刘振江昌平1mL；
----洗脱液用0.22μm 微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。
* 每次上样前都要将上次液体完全排干。
5.5 液相测定
5.5.1 液相谱条件
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