1、目的
为了规范亲和柱净化样本中黄曲霉毒素的操作流程,特制订本操作规程。 2、范围
本标准适用于粮食、饲料、中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测。
3、检出限和定量限
项目
岛津安捷伦
样本检出限
(µg/kg
样本定量限
(µg/kg
样本检出限
(µg/kg
样本定量限
(µg/kg
AFG10.12 0.4 0.9 3.0
AFG20.08 0.2 0.3 0.86
AFB10.08 0.2 0.6 1.97
AFB20.04 0.12 0.2 0.63 4、职责
部门名称部门职责
质量管理部1、负责本制度的实施。
2、负责本制度的监督执行。
5、程序
5.1 原理
测定的基础是抗原、抗体反应,抗体连接在柱体内,样品中的黄曲霉毒素B1经过提取、过滤、稀释,然后缓慢的通过黄曲霉毒素B1免疫亲和柱,在免疫亲和柱内毒素与抗体结合,之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱黄曲霉毒素B1,然后注入到分析仪器中用于检测。 5.2 溶液配制
5.2.1 70%甲醇-水溶液:取700mL甲醇,加入300ml去离子水混匀即可。
5.2.2 80%乙腈-水溶液:取800m乙腈,加入200ml去离子混匀即可。
康纳乐霜5.2.3 1% 吐温-水溶液:取1ml 吐温-20,加入去离子水并定容至100ml。
5.2.4 黄曲霉毒素混合标准工作液:用谱级甲醇将储备工作液分别稀释到50 ng/ml、
20 ng/ml、10 ng/ml、5 ng/ml、1 ng/ml、0.5 ng/ml。
5.3 样品前处理
5.3 1 适用于玉米、小麦等粮食作物,花生及其制品,坚果、玉米油、花生油、饲料等
样品
----25g±0.01g 样品(固体样品需粉碎,并过2mm 分样筛,加入5g 氯化钠与125mL 70% 甲醇-
水溶液混匀;
----高速均质(≥10,000r/min1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;
----取10mL 滤液加入20mL 蒸馏水稀释,再用微纤维滤纸过滤,并收集滤液作为上样液;
maop
----取15mL 上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数:1
5.3.2 适用于辣椒、花椒、黄豆酱等调料,面粉、麦芯粉、芝麻油及其它植物油、谷草
等样品
----25g±0.01g 样品(固体样品需粉碎,并过2mm 分样筛加入125mL 80%乙腈-水溶液混匀;
----高速均质(≥10,000r/min1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;
-
---取10mL 滤液加入40mL 蒸馏水稀释,再用微纤维滤纸过滤,并收集滤液作为上样液;
----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数:1
5.3.3 适用于中药(2015 版药典规定的19 味中药等
----15g±0.01g 样品(固体样品需粉碎,并过2mm 分样筛加入75mL 80%乙腈-水溶液混匀;
----高速均质(≥10,000r/min1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速定性滤纸过滤,收集滤液;
----取10mL 滤液加入40mL 1% 吐温-水溶液,再用微纤维滤纸过滤,并收集滤液作为上样液;
----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数:1
b15.3.4 适用茶叶样品:
----10g±0.01g 加入2g 氯化钠,加入纯甲醇溶液100mL,混匀;
----高速均质(≥10,000r/min均质1min,或摇床(200r/min~300r/min剧烈振荡20min,用快速滤纸过滤,收集滤液;
----取10mL 滤液加入40mL 蒸馏水稀释,再用微纤维滤纸过滤,并收集滤液作为上样液;
----取25mL 上样液过免疫亲和柱净化。
igf-1稀释倍数:2
农村业余文化生活5.4 净化
----取出免疫亲和柱,将上方塞子取出斜剪断,再插回亲和柱上;(3mL 的免疫亲和柱去掉上方塞子,安装上转接头,将转接头另一端与注射器固定后使用
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