1 适用范围
本方法适用于测定全价饲料及脂肪含量小的固体原料（如玉米、玉米副产物等）。
2 操作方法
1 样品处理：称取5.0g粉碎后的样品于具塞三角瓶中，准确加入25.0毫升甲醇水（1+1）溶液，（现配现用）。振摇15分钟过滤，收集试样滤液，此液为样品提取液。根据样品的国家标准允许量标准，用A试剂（样品稀释液）将样品提取液进行适当稀释，玉米一般将提取液稀释10倍（取滤液50uL+450uLA试剂），全价料滤液一般稀释4倍（取滤液50uL+150uLA试剂）稀释后放在混匀器上混匀，即为待测样液。 2、试剂的配制：每瓶C试剂准确加入1.5毫升D试剂（用移液移两个750uL）。配成实验用酶标抗原溶液；取一瓶E试剂（浓缩洗涤液）加入300毫升蒸馏水中，配成洗涤液待用，均在2—8℃保存。 3、试剂平衡：将测试盒于室温中放置15分钟以上，平衡至室温。
4、小孔编号：根据实验需要截取相当孔数放置反应板框架上，设定一号孔为仪器调零孔（空白孔），2号孔为阴性对照孔，3号孔为阳性对照孔，其余孔为样品孔。
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5、洗板（激活抗原）：每孔加入250uL洗涤液，洗涤液不得溢出，放置1分钟后，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干（注意：不能在同一张纸上重复多次拍打），重复洗板一次，放置、甩掉、拍干。
99se6、加样：第1步：第一个孔加50uLA稀释剂，第二个加50uLB试剂（0.1AFB1标准溶液），第三个孔加50 uLB试剂（1 AFB1标准溶液），其余孔加入相应待测样液。b1
第2步：1号孔加入50uLD试剂，从第2个孔开始加50uLC试剂，加完轻轻摇下，在37℃培养箱中培养半个小时，最好用书包着避光。半个小时后，洗板，甩掉反应液，拍干。每孔加入250洗涤液后，放置两分钟，甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，再重复洗涤4次。第3步：显：每孔分别加入50uL F试剂（显液）和50uL G试剂（显液），摇匀，将反应板放入37℃恒温培养箱中显15分钟（可以F和G混合加100uL，现用现配）。
7、限量判断：
1、目视法测定：先比较1—3孔颜。若2号孔（阴性孔）颜最深（蓝紫），3号孔
（阳性孔）次之，1号孔（空白孔）接近无，说明试剂有效及操作无误。比较样品孔
与三号孔（阳性孔）颜，若浅者，则为阳性，若深者，则为阴性，若颜接近，则用
仪器法测定。
2、仪器法测定：每孔分别加入H试剂（终止液）50uL，然后用酶标仪在450波长处测定
各孔的吸光度A值，测定前酶标仪需预热15分钟，打在T档对准空白拉开调零，关闭调
100，当稳定后打在A档分别对准各孔读数。，读完后对准空白，看是否显示在100左右，
若没有说明仪器不稳定，还需要重新调零。若A样品孔＜A阳性孔为阳性，若A样品孔
≥A阳性孔为阴性。
若样品的吸光度值在A0.1和A1之间则：
A0.1-A样品
AFB1（ppb）= D×log （ -1 ）
A0.1-A1.0
D —稀释倍数（稀释倍数=甲醇体积*滤液稀释倍数/样品质量）
A0.1 —二号孔的吸光度值
A1 —三号孔的吸光度值
A样品—样品的吸光度值。
注意：
AFB1试剂盒要在2～8℃保存；每次实验时应尽量使用新配制的洗涤液；洗涤时盖洛普q12
间戊二烯要迅速，洗涤液不可溢出，以防交叉污染；不同批次测试盒的试剂不能混用；试剂使用
前要摇匀；加样后要轻轻振摇整板，使反应液混匀；加样要准确，直接加到小孔底部，
不可有气泡，不要加到孔壁上；样品处理后及反应过程中避免强光照射，最好在操作中
定位板拉上窗帘；操作中注意安全，操作中所用器皿要用5%NaClO或洗粉水浸泡半天后洗涤。
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