2010年版兽药典三部增、修订品种品名中国兽药典(2010年版三部)
检验用培养基配制法[修订] 新增质控项；新增两种培养基。 1硫乙醇酸盐培养基（T.G）
1.1 成分
胰酪蛋白胨15 g
酵母浸出粉 5.0 g
葡萄糖 5.0 g
硫乙醇酸钠0.5 g
Ｌ-半胱氨酸盐酸盐0.5 g
琼脂（粉） 0.5～0.7 g
氯化钠 2.5 g
0.2％美蓝溶液（或1％刃天青溶液1.0 ml）0.5 ml
注射用水加至1000 ml
1.2 制法
将以上成分混合，加热溶解。用氢氧化钠溶液调整pH值至7.0～7.4。分装于中性容器中，以116℃灭菌20～40分钟。 注：T.G培养基上层1/3变红时，需煮沸驱氧后再用，但不宜反复驱氧。
水处理控制系统1.3 质控
1.3.1 性状澄清透明的淡黄液体，溶液上层0.5～1.0 cm为红。 1.3.2 pH值为7.0～7.4。
1.3.3 微生物促生长试验检验本品所用质控菌株需氧菌为金黄葡萄球菌CVCC 2086和铜绿假单孢菌CVCC 2000，厌氧菌为生孢梭菌CVCC 1180。 用0.1％蛋白胨水将菌液或冻干用工作种子制成1～50 CFU/ml，取菌液各1.0 ml，分别接种于9.0 ml被 检培养基，每种菌接种3支，同时设1支不接种的培养基作为阴性对照。置35～37℃温箱培养3日，逐日观察。接种管3/3有菌生长且阴性对照管无菌生长，判定培养基合格。
2酪胨琼脂培养基（G.A）
2.1 成分
胰酪蛋白胨15 g
酵母浸出粉 5.0 g
葡萄糖 5.0 g
Ｌ-半胱氨酸盐酸盐0.5 g
琼脂（粉）12 g
氯化钠 2.5 g
注射用水加至1000 ml
2.2 制法
将以上成分混合，加热溶解。用氢氧化钠溶液调整pH值至7.0～7.4。分装于中性容器中，以116℃灭菌20～40分钟。
2.3 质控
2.3.1 性状为淡黄固体。
2.3.2 pH值为7.2～7.4。
2.3.3 菌落生长试验
接种0.2 ml含10～50 CFU的金黄葡萄球菌CVCC 2086、铜绿假单孢菌CVCC 2000菌液于酪胨琼脂平板，每个菌株接种3块，设1块不接种的平板作为阴性对照，37℃培养24～48小时后观察。如果金黄葡萄球菌菌落形态呈S 型，全部产生金黄素。铜绿假单孢菌菌落形态呈R型，30％以上产生绿素。且阴性对照无菌生长，则判定培养基合格。
3 葡萄糖蛋白胨培养基（G.P）
3.1 成分
葡萄糖20 g
蛋白胨 5.0 g
酵母浸出粉（酵母浸出液100 ml） 2.5 g
磷酸氢二钾 1.0 g
硫酸镁（含7个结晶水）0.5 g
琼脂粉0.4 g
注射用水加至1000 ml
3.2 制法
将以上成份混合，加热溶解。分装于中性容器中，以l16℃灭菌20～40分钟，pH值应为6.0～6.6。
3.3 质控
3.3.1 性状淡黄液体。
3.3.2 pH值为6.0～6.6。
3.3.3 微生物促生长试验检验本品所用质控菌株为白念珠菌CVCC3597和黑曲霉CVCC 3596。
用0.1％蛋白胨水将菌液或冻干用工作种子制成1～50CFU/ml，取菌液各1.0 ml，分别接种于9.0 ml试验用培养基，每种菌接种3支，同时设1支不接种的培养基作为阴性对照。置24～26℃培养5日，逐日观察。接种管3/3有菌生长且阴性对照管无菌生长，判定培养基合格。
4 改良Frey氏液体培养基
4.1 成分
氯化钠 5.0 g
氯化钾0.4 g
硫酸镁（含7个结晶水）0.2 g
磷酸氢二钠（含12个结晶水） 1.6 g
磷酸二氢钾0.2 g
葡萄糖10 g
乳蛋白水解物 5.0 g
酵母粉（或25％酵母浸出液 100 ml） 5.0 g
1％辅酶I溶液10 ml
1％Ｌ-半胱氨酸溶液10 ml
2％精氨酸溶液20 ml
猪（马）血清100 ml
1％酚红溶液 1.0 ml
8万单位/ml青霉素10 ml
1%溶液10 ml
刃天青
注射用水加至1000 ml
4.2 制法
用氢氧化钠溶液（1.0 mol/L）调整pH值至7.6～7.8，滤过除菌，定量分装，置－20 ℃保存。
4.3 质控
4.3.1 性状培养基应澄清、无杂质，呈玫瑰红。
4.3.2 pH值为7.6～7.8。
4.3.3 无菌检验按附录进行，应无菌生长。
阴阳互易
4.3.4 灵敏度试验和微生物促生长试验两种检验方法任选其一。检验本品所用质控菌株为滑液支原体CVCC 2960，传代不得超过5代。
4.3.4.1 灵敏度试验
质控菌种接种至液体培养基小管中，作10倍系列稀释至10-9，取1支未接种的培养基小管作为阴性对照，置35～37℃培养5～7日；同时取10-5稀释度菌液0.2ml接种于固体培养基平板，于37℃、5%CO2培养箱中培养5～7日，观察结果。
以培养基呈现生长变的最高稀释度作为其灵敏度。做两组，如果2组试验的液体培养基灵敏度均达到
10-8及以上，且阴性对照不变；固体培养基可见支原体菌落生长，判定培养基合格。仅1组试验结果达到10-8及以上，需倍量重检，重检后，如均达到10-8及以上，判为合格。其它情况均判为不合格。
4.3.4.2微生物促生长试验
将1～50 CFU/0.2 ml质控菌液体培养物接种于1.8ml液体培养基，置35～37℃培养5～7日；1～50 CFU/0.2 ml的培养物接种固体培养基平板，置37℃、5％CO2培养箱中培养5～7日。如果固体培养基有支原体菌落生长，并伴有液体培养基颜变化，判定培养基合格。
5 改良Frey氏固体培养基
5.1 成分
氯化钠 5.0 g
氯化钾0.4 g
硫酸镁（含7个结晶水）0.2 g
磷酸氢二钠（含12个结晶水） 1.6 g
磷酸二氢钾0.2 g
葡萄糖10 g
乳蛋白水解物 5.0 g
酵母粉（或25％酵母浸出液100 ml） 5.0 g
琼脂粉15 g
1%溶液10 ml
注射用水加至1000 ml
5.2 制法
上述成分混合后加热溶解，定量分装，以116℃灭菌20分钟后，置2～8℃保存。使用前将100 ml固体培养基加热溶解，当温度降到60℃左右时，添加辅助成分。
辅助成分：
猪（马）血清10 ml
dmso
2％精氨酸溶液 2.0 ml
电网调度管理条例1％辅酶I溶液 1.0 ml
1％ L-半胱氨酸溶液 1.0 ml
8万单位/ml青霉素 1.0 ml 注：上述成分混合后，滤过除菌，定量分装，置－20℃保存。
5.3 质控
5.3.1 性状固体培养基基础成分呈淡黄，加热溶解后无絮状物或沉淀；辅助液呈淡黄。蛋白芯片
5.3.2 pH值为7.6～7.8。
5.3.3 无菌检验按附录进行，应无菌生长。
5.3.4 同4.3.4。
6 支原体液体培养基
6.1 成分
PPLO肉汤粉21 g
葡萄糖 5.0 g
10％精氨酸溶液10 ml
10倍浓缩MEM培养液10 ml
酵母粉（或25％酵母浸出液100 ml） 5.0 g
8万单位/ml青霉素10 ml
1%溶液10 ml
猪（马）血清100 ml
1％酚红溶液 1.0 ml
注射用水加至1000 ml
6.2 制法
用氢氧化钠溶液（1.0 mol/L）调整pH值至7.6～7.8，滤过除菌，定量分装，置-20℃保存。
6.3 质控
6.3.1 性状培养基应澄清、无杂质，呈玫瑰红。
6.3.2 pH值为
7.6～7.8。
6.3.3 无菌检验按附录进行，应无菌生长。
6.3.4 灵敏度试验和微生物促生长试验两种检验方法任选其一。检验本品所用质控菌株为猪鼻支原体CVCC 361，传代不得超过5代。
6.3.4.1 灵敏度试验
质控菌种工作种子液接种至液体培养基小管中，作10倍系列稀释至10-9，取1支未接种的培养基小管作为阴性对照，置35～37℃培养5～7日；同时取10-5稀释度菌液0.2ml接种于固体培养基平板，于37℃、5%CO2培养箱中培养5～7日，观察结果。
以培养基呈现生长变的最高稀释度作为其灵敏度。重复2次试验。如果液体培养基灵敏度均达到10-8及以上，且阴性对照不变；固体培养基可见支原体菌落生长，判定培养基合格。仅1次试验达到10-8及以上，需倍量重检，重检后，如均达到10-8及以上，判为合格。其它情况均判为不合格。
6.3.4.2 微生物促生长试验
将1～50 CFU/0.2 ml质控菌液体培养物接种于1.8 ml液体培养基，置35～
37℃培养5～7日；1～50 CFU/0.2 ml的培养物接种固体培养基平板，置37℃、5％CO2培养箱中培养5～7日。如果固体培养基有支原体菌落生长，并伴有液体培养基颜变化，判定培养基合格。
7 支原体固体培养基
7.1 成分
PPLO肉汤粉21 g
葡萄糖 5.0 g
酵母粉（或25％酵母浸出液 100 ml） 5.0 g
琼脂粉15 g
1%溶液10 ml
注射用水加至1000 ml
7.2 制法
上述成分混合后加热溶解，定量分装，以116℃灭菌20分钟后，置2～8℃保存。使用前将100 ml固体培养基加热溶解，当温度降到60 ℃左右时，添加辅助成分。
辅助成分：
血清10 ml
10％精氨酸溶液 2.0 ml
10倍浓缩MEM培养液 1.0 ml
8万单位/ml青霉素溶液 1.0 ml 注：上述成分混合后，滤过除菌，定量分装，置－20℃保存。
7.3 质控
7.3.1 性状固体培养基基础成分呈淡黄，加热溶解后无絮状物或沉淀；辅助液呈淡黄。
7.3.2 pH值为7.6～7.8。
7.3.3 无菌检验按附录进行，应无菌生长。
7.3.4 同6.3.4。
8 无血清支原体培养基
8.1 成分
PPLO肉汤粉21 g
葡萄糖 5.0 g
10％精氨酸溶液10 ml
10倍浓缩MEM培养液10 ml
酵母粉（或25％酵母浸出液100 ml） 5.0 g
8万单位/ml青霉素10 ml
1%溶液10 ml
1％酚红溶液 1.0 ml
注射用水加至1000 ml
8.2 制法
用氢氧化钠溶液（1.0 mol/L）调整pH值至7.6～7.8，滤过除菌，定量分装，置－20℃保存。
8.3 质控同4.3。
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