第十七章 厌氧性细菌及检验
本章内容 一、概述 厌氧菌的分类 厌氧菌的临床意义 厌氧菌感染 厌氧菌标本的采集与送检 厌氧菌的分离与鉴定 厌氧环境的指示 二、常见厌氧菌 破伤风杆菌 产气荚膜梭菌合成氨反应
肉毒梭菌 艰难梭菌 厌氧球菌
无芽胞厌氧菌
厌氧菌概述
一大专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。
G+有芽胞的梭菌：有芽胞，抵抗力强，广泛存在，可出芽繁殖，产生多种外毒素，引起严重疾病。
G+/G-无芽胞的球菌与杆菌：人体正常菌，可存在于口腔、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道等。致病性属条件致病性的内源性感染。
厌氧菌概述——分类
《伯杰系统细菌学手册》分类标准：
无芽胞厌氧菌有40多个菌属，300多个菌种和亚种；而有芽胞的厌氧菌只有梭菌属，包括130个种。
据耐氧性分类
（1）专性厌氧菌：是指在降低氧分压的条件下才能生长的细菌。又分为极度厌氧菌（氧分压＜0.5%，空气中暴露10min致死，如丁酸弧菌）和中度厌氧菌（氧分压为2%～8%，
空气中暴露60～90min能生存，如大多数人类致病厌氧菌）。 （2）微需氧菌：能在含5%～10%CO刃天青2空气中的固体培养基表面生长的细菌，如弯曲菌属。 （3）耐氧菌：其耐氧程度刚好能在新鲜配制的固体培养基表面生长。一旦生长，暴露数小时仍不死亡，如第三梭菌、溶组织梭菌。 厌氧菌概述——临床意义及感染
感染类型
外源性感染：梭状芽胞杆菌属引起的感染。
内源性感染：无芽胞厌氧菌大多数是人体正常菌，属于条件致病菌，在一定条件下可引起感染，一般不在人中传播。
感染的危险因素：
组织缺氧缺血；
机体免疫功能下降；
某些手术及创伤易发生厌氧菌感染；
长期应用某些抗菌药物；改进工作作风 密切联系众
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深部需氧菌感染。
感染的临床指征：
感染局部产生大量气体；
ppva 多发生在黏膜附近；
深部外伤后继发感染；
分泌物有恶臭或为暗红；
常见于长期应用氨基糖苷类抗生素无效的病例；
镜检有细菌，常规培养阴性。
厌氧菌概述——标本的采集与送检
重要原则：标本绝对不能被正常菌所污染；应尽量避免接触空气。
适宜标本 | 血液、骨髓、脑脊液、关节液、心包液、胸腔积液、腹腔液、胆汁、由活检或尸体解剖获得的组织标本、深部脓肿抽取物、经环甲膜以下或肺穿刺抽取的肺渗出物、后穹窿穿刺抽取的盆腔渗出液及无菌套管抽取的宫腔内容物、膀胱穿刺液及其它组织穿刺液等 |
不宜标本 张锴雍 | 鼻咽拭子、齿龈拭子、直肠拭子、喀出的痰液、自然排出的尿液和导出的尿液、流出的脓液、接近皮肤或黏膜的分泌物、阴道分泌物、胃和小肠内容物、粪便（艰难梭菌除外）等 |
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厌氧菌概述——标本的采集与送检
采集
多采用针筒抽取、穿刺等，应严格无菌操作，严禁接触空气。
厌氧培养最理想的检查材料是组织标本，因厌氧菌在组织中比在渗出物中更易生长。
送检
针筒运送：液体标本。
无菌小瓶运送：液体标本。
棉拭子运送：需使用特制运送培养基。
厌氧罐/厌氧袋运送：较大组织块或床边接种的培养皿等。
标本送到实验室后，应在20～30min内处理完毕，最迟不超过2h。如不能及时接种，应室温保存。
厌氧菌概述——分离与鉴定
直接镜检
根据形态和染性，结合标本性状与气味，初步对标本中可能有的细菌作出估计。
分离培养
初代培养和次代培养两个阶段。
初代培养的一般原则：
（1）先将标本涂片染直接镜检，指导培养基的选择；
（2）尽量选用在厌氧菌中覆盖面宽的非选择性培养基；
（3）最好多选1～2种覆盖面不同的选择性培养基；
（4）尽量保证培养基新鲜；
（5）要考虑到微需氧菌存在的可能。
非选择培养基：心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆胨肝粉琼脂（GAM）、胰胨酵母琼脂（EG）、CDC厌氧血琼脂等。
选择培养基：KVLB血平板（即上述非选择培养基中加卡那霉素和万古霉素），KVLB冻溶血平板（产黑素类杆菌早期产生黑素），七叶苷胆汁平板（BBE，用于脆弱类杆菌），F
S培养基（梭杆菌选择培养基），卵黄（EYA）及兔血平板（RBA）（用于产气荚膜梭菌），CCFA培养基（艰难梭菌选择培养基）等。
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