一、石蜡包埋:
纳纱1.脱水:组织水洗后便可酒精脱水,70% →80% →90% →95%→100%酒精(无水乙醇)→100%酒精,各级酒精脱水时间30-45 min。 (注意:80%酒精内组织可留之较久,当天如果来不及做完就可以暂时保存一晚上,次日再继续做下去。70%的酒精可作为更久的保存剂。)
2.透蜡:脱水后组织:50%酒精+50%二甲苯 30 - 45min.
二甲苯 (组织透明即可停止) 15min.
50%二甲苯+50%石蜡 20-30min.纯石蜡1 45min.
纯石蜡2 45min.
(透腊之前做好准备工作:准备腊杯,烘箱温度保持55—60℃左右,使石腊熔化,温度不宜过高,以免使组织发脆。)
3.包埋:
a.折好纸盒,准备小镊子、酒精灯、解剖针、冷水等。
b.用温热吸管吸取石蜡注入纸盒。等待底稍微凝固,温镊子夹住样品放入盒子中央,面朝底(可以将蜡一次倒入纸盒,然后待蜡表面起膜后,用温镊子夹住样品放入蜡中,待冷却即可,整个操作过程中,切勿让蜡中起气泡)。
c.两手拿着两端,入冷水一半,吹气,使表面石蜡形成移较厚腊层,然后急速全部进入冷水中3分钟。新疆自贸区
d.修正蜡块(上下两个面一定要平行并且光滑)
e.固着蜡块
二、切片
1.切片(切片时,可以在刀片以及刀片周围涂上一点甘油)
2.贴片烤片(甘油蛋白=1/2甘油+1/2鸡蛋清)(在贴片时,用细吸管取一点点甘油蛋白(越少越好)于载玻片上,然后用手抹匀,手一定要干净。将切片放在载玻片(光亮面朝向下),然后滴几滴冷水使切片悬于水上。接着将载玻片放在37℃上烘烤。
常见问题分析:
1.切片分离不能形成蜡带: ☞ 室温过低,蜡过硬。
2.蜡带弯曲:森林之神与仙女们☞ 蜡块口下面不平行,或蜡块不与刀刃平行所致。
3.切片厚薄不一: ☞ 切片刀或蜡块未固定紧。
4.切成片后,组织与蜡块脱离:☞ 脱水不干净等。
5.蜡片易粘在切片上或蜡片萎缩:☞ 室温太高或蜡太软或刀的角度太小。难耐的残酷
6.切片破裂:☞ 浸蜡不足或浸蜡温度过高,或在脱水剂、透明剂中时间过长,引起组织发脆或有杂质,材料脱钙不完全,此种无法补救。
7.蜡片上卷,切过刀口即破裂:☞ 刀口太钝或沾有石蜡或刀的角度过大或蜡太硬。
*:包埋时,时间长会使标本变质,过短则石蜡不能透进标本。石蜡包埋过程中,注意控制温度保持在58-60℃,石蜡不能融化。
三、染
二甲苯脱蜡(1) 10----15分钟
二甲苯脱蜡(2) 10----15分钟
荔波县朝阳高铁隧道透水事件1/2 二甲苯+1/2 100% 酒精 3-----5分钟
100% 酒精 10分钟
95%酒精 10分钟
80%酒精 10分钟
70%酒精 10分钟
50%酒精 10分钟
蒸馏水洗 1-------3分钟组织切片
苏木精染 10-------15分钟
自来水冲洗 3-------5分钟或者更长
伊红(曙红)复染 3-------5分钟或者1---2 分钟
70%酒精 1-------2分钟
80%酒精 1------2分钟
95%酒精(1) 1------2分钟
95%酒精(2) 1-------2分钟
100%酒精(1) 1-------2分钟
100%酒精(2) 1--------2分钟
二甲苯(1) 5
二甲苯(2) 5
封片