[精华]开放ods柱谱在分离纯化中的应用

开放ODS柱谱在分离纯化中的应用
什么是ODS?
ODS是英文octadecyl silane的缩写,意思是十八烷基硅烷,是以硅胶为基质键合的C18填料,属于反相谱。ODS柱谱,简单地说,就是指用ODS装成的谱柱啦。“开放”一词,是指未对谱柱施加任何压力,让其在重力作用下洗脱;相对于开放ODS柱谱,有中低压柱谱,高低柱谱等等。
我们平时所说的反相HPLC,一定程度上来说,其实也可以说是ODS柱谱,只不过它的分离效果更好,还配备了紫外或者示差等高级地检测手段,其实质还是属于反相柱谱。学苑追艳录
适用范围有哪些?杨诗丽
首先需要说明:ODS在分离纯化的过程中,起着极为巨大的作用!!
就化合物极性而言,ODS适合分离极性中等偏大的化合物类型。对于极性较小的化合物,应该考虑用硅胶、凝胶等手段进行分离纯化,绝对不要尝试ODS,唯一的后果只能是:样品全部死吸附,根本不可能洗脱!!
某些行业,前处理一般是萃取,比如环己烷/石油醚、乙酸乙酯/氯仿、正丁醇、水。水层的、正丁醇层的
样品,一般都可以用ODS进行分离纯化;乙酸乙酯层的样品,极性偏大的部分可以考虑用ODS;至于环己烷层的样品,千万不要使用ODS,那将是:上样量多少,死吸附就有多少!!
就化合物分类而言,ODS对于黄酮苷类、环烯醚萜苷类、糖苷类等成分都能有一定的分离效果,也有很多成功的分离纯化实例。但是,对于苷元类化合物,则需要慎重考虑,其实还是极性大小的问题:苷元类化合物,一般极性较小。
如何装柱、上样、洗脱?
装柱:新买来的ODS,用甲醇浸泡过夜后即可装柱。具体的装柱方法,跟硅胶的装柱子法是一样的,记得用甲醇装柱就行。装完以后,置换成起始流动相系统,即可投入使用了。多感官
上样:分为两种,一种是湿法上样,另一种是拌样。湿法上样,不必多说,就是将样品溶解至一定体积(强烈建议用起始流动相溶解,但体积不可过大,太大相当于原点变大,分离度变差),然后上样;至于拌样,很多的观点表示ODS不应该拌样,我在这里指出,依我个人经验来看,拌样是可以的,尤其对于一些溶解性较差的样品,拌样后分离的效果,比湿法上样好很多,大家可以尝试。(所谓拌样,就是指将你的样品溶解,然后从柱子里面掏出小部分ODS,然后进行拌匀,注意不要过载)
洗脱过程:如果你有ODS薄层板,你可以先点板看看样品大概的极性大小。如果你没有ODS板,你拿
证据智能系统到的是“盲样”,一般可以采取常规的梯度洗脱,如水——30%甲醇/水——50%甲醇/水——70%甲醇/水——100%甲醇,然后依据各流分样品量的大小进一步进行细分;经过常规的梯度洗脱以后,假设,你的样品集中在50%的甲醇/水部分,进行细分的时候,你就可以选择40%甲醇/水——45%甲醇/水——50%甲醇/水——100%甲醇这样的梯度。
流动相的选择:其实就是反相流动相,无非就是甲醇/水,乙腈/水,流动相中也可以加入一些其他物质。我曾经很多次加入乙酸,用来改善拖尾的现象(点ODS薄层板分析过)。至于缓冲盐,我没有试过,具体情况不太了解。
洗脱样品的如何处理?
洗脱下来的样品,可用硅胶薄层板进行点板分析,然后将相同流分进行合并,也可以采用HPLC检测合并。
我认为,对于一些量小的流分,相差不是很大的,尽量合并,避免样品的分散;
对于一些量大的流分,可合可不合,反正量大,合与不合的效果是一样的(无非就是多占点空间);
羟氨苄青霉素从ODS上洗脱的流分,很可能是纯品;易结晶的样品,会在溶剂挥发的过程中结晶析出来,要注意观察;
柱子被污染如何处理?
污染是正常的,见过那么多,也用过那么多ODS柱子,没有哪一根能在使用一段时间后保持“洁白无瑕”的。
被污染,一般情况下就是用甲醇冲洗,一直到冲洗液蒸干没有杂质为止,就可以进行下一批样品的分离了。谱纯
也许有人问:你这么处理彻底吗?回答是否定的,但是,对于ODS柱谱,这样的处理已经足够了。
道理很简单,用ODS进行分离的样品,一般极性不会很小,70%甲醇/水基本能全部冲洗下来。现在已经用甲醇冲洗得差不多,在你对下一批样品进行分离的时候,上一批残留的杂质也就只有100%的甲醇能洗脱下来,根本不会影响。

本文发布于:2024-09-20 18:29:56,感谢您对本站的认可!

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