孙树周，何燕莉，陈泳恩，李奥迪（广州市番禺区食品药品检验所，广东广州511400)
摘要：目的建立凉茶中26种止咳平喘类化学药物的快速筛查方法。方法采用液相谱-串联质谱法，样品经甲醇提取，经 0.22卜m微孔滤膜过滤，以5 m m o l.L—甲酸铵（0.1%甲酸）水溶液-乙腈溶液作为流动相进行洗脱，用C18(2.1 m m x150 m m, 3.5 jxm)谱柱分离，多反应监测（M R M)模式进行定性和定量分析。结果 26种化学药物线性相关系数均>0.995，平均回收率为61.2%~115.6%，相对标准偏差为1.0%~2.0%(n=6)。结论该方法简单、快速、灵敏，可用于凉茶中非法添加的26 种止咳平喘类化学药物的检测。
关键词：液相谱-串联质谱法；凉茶；非法添加；止咳平喘
中图分类号：R917文献标志码：A文章编号：1674-229X( 2021)03-0195-05
Doi ：10.12048/j. issn. 1674-229X. 2021.03.010
Determination of 26 Chemical Drugs for the Treatment of Cough and Asthma Added Illegally in Herbal Tea by High Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry
SUN Shuzhou,HE Yanli,CHEN Yongen,LI KoAi{Panyu Institute for Food and Drug Control,Guangzhou,Guangdong 5WAQ0, China)
A B S T R A C T：O B J E C T I V E To establish a rapid screening method for determination of 26 chemical drugs for the treatment of cough and asthma added illegally in herbal tea. M E T H O D S This method involved liquid chromatography-tandem mass spectrometr) .T he samples were extracted with methanol,filtrated by 0.22 (xm microporous filters and finally separated on a C18 column(2.1 m m x l50 m m, 3.5 fJim) by using acetonitrile and water(containing 5 m m o l*L 'a m m o n i u m formate and 0.1% formic acid) as mobile phase.Qualitative and quantitative analysis were carried out in multiple reaction monitoring (M R M)model. R E S U L T S T h e correlative coefficient of 26 chemical drugs were above 0.995.T he average recoveries were 61.2%~ 115.6%,the relative standard deviations ranged from 1.0%to 2.0%(n = 6). C O N C L U S I O N T h e method is simple,rapid and sensitive.lt is suitable for the determination of 26 chemical drugs for the treatment of cough and asthma added illegally in herbal tea.
K E Y W O R D S：high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry；herbal tea；illegal addition；checking cough and relieving asthma
岭南地区食疗文化以其特有的气候特点和文化 氛围为基础，以凉茶、老火汤等特食品为代表进行 养生保健[1]。凉茶是一种药食同源中草药植物类饮 料，具有清热解毒、生津止渴等功效。市售散装凉茶 种类多分为感冒茶、咽喉茶、牙疼茶等，但凉茶是食 品，不能宣称疗效，不能添加化学药物，由于利益驱 使，不法分子向自制凉茶中违法添加止咳平喘类化 学药物以提高其功效。消费者长期饮用含有化学药 物的凉茶会产生不良反应，甚至危及生命[24]。
凉茶非法添加成分测定参照现行有效标准包 括：国家市场监管总局2017年第160号公告发布 《饮料、茶叶及相关制品中对乙酰氨基酚等59种化合物的测定BJS 201713》[〜、广东省药品检验所-关 于提交《凉茶中马来酸氯苯那敏等6种化学成分的 测定方法》的函[6]、广东省药品检验所-关于提交《凉 茶中对乙酰氨基酚等25种化学成分的检测方法》的 函[7]。上述标准中含止咳化痰类的化学成分种类较 少，止咳化痰类（5种）仅包括：盐酸苯海拉明、氯苯 那敏、茶碱、枸橼酸喷托维林、磷酸苯丙哌林。随着 监管部门对凉茶非法添加打击力度加大，不法分子 为逃避执法处罚，违法添加标准以外的成分以达到 宣称的疗效。 凉茶中含有大量的亲水性多糖、鞣质、蛋白质以 及叶绿素等，成分复杂，利用薄层谱法[8]、高效液
作者简介：孙树周，副主任药师，研究方向：食品药品检验,E-mail: x k_p y@ 126
今日药学2021年3月第31卷第3期Pharmacy Today , 2021March, Vol.31No.3• 195•
相谱法等无法同时对多种化学成分进行分析。液 相谱串联质谱技术是结合了谱对复杂样品的高 分离能力和质谱的高选择性，高灵敏度的优点，广泛 应用于食品药品检测等领域。国内学者对凉茶成分 或非法添加化学成分的研究较多，但针对止咳化痰 类的多成分研究较少，类别包括的成分不够全面，如张科明等学者对凉茶的10种止咳成分进行测定研 究[<M5]。因此，建立针对凉茶中非法添加止咳平喘 类多成分分析、且简便快捷的方法具有重要的现实 意义。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
高效液相-串联质谱仪（ExionLC AC-Triple Q uad 4500，美国 AB SCIEX)，XTerra C l8 谱柱(2.1 mmx150 mm，3_5 |xm，美国 W aters公司），Elma-sonic EASY超声波清洗机（德国Elma公司），ULUP-IV-20T超纯水机（中国优普公司）。26种标准品：盐酸克伦特罗、马来酸溴苯那敏、盐酸曲吡那敏购自 Dr.Ehrenstorfer Gm bH；盐酸轻嗓、盐酸异丙嗓、盐酸 麻黄碱、盐酸苯海拉明、磷酸苯丙哏林购自中国药品 生物制品鉴定所；盐酸氨溴索、盐酸氯丙嗪、硫酸特 布他林、沙丁胺醇、盐酸溴己新、氢溴酸右美沙芬、枸 橼酸喷托维林、地氯雷他定、马来酸氯苯那敏、氯雷 他定、二羟丙茶碱、盐酸二氧丙嗉、茶碱、盐酸西替利 嗪、特非那定、盐酸氟奋乃静、富马酸酮替芬购自中 国食品药品检定研究院；奋乃静购自上海源叶生物 科技有限公司。乙腈（谱纯，批号:JA083830)、甲酸铵（谱纯，
批号：85050040)、平酸（谱纯，批 号：182088)，其他试剂均为分析纯；实验用水均为 超纯水。
1.2方法
1.2.1液相谱条件谱柱：XTerra C18(2.1 m m xl50 mm，3.5 |xm)，柱温为 30 X：，流速为 0.3 mL.m irT1，进样量为2 (xL；流动相A为5 m m ol•I/1甲酸铵 -0.1%甲酸水溶液，流动相B为乙腈溶液，梯度洗 脱，A:B，0~3min 为 90% :10%，3~5min，由 90% : 10%—58% :42%，5~ 10 min，由 58% :42%->55% : 45%。10~14 min，由55% :45% — 50% :50%，14~ 18 min，由 50% :50%—30% :70%，18.0~ 18.1 min，由 30%:70%—90% :10%, 18.丨 ~ 25 min，由 90% : 10%—90%:10%〇
196*Pharmacy Today,2021 March,Vol.31 No.31.2.2质谱条件离子源为电喷雾离子源（ESI)，正 离子源电压为5 500 V，负离子源电压为-4 500 V，气 帘气流量:36.0 psi；碰撞气流量:9 psi；离子源电压: 5 500 V；接口温度:550 雾化器压力:40 psi；辅助加热气流量:45 Psi。采用多反应监测（MRM)模式，待测物的母离子、子离子及化合物参数见表1。
表1质谱参数表
名称
母离子
(m/z)
子离子
(m/z)
锥孔电压
/V
碰撞能量
/eV
克伦特罗277.1203.0 V259.06522/16
氯丙嗪319.186.2*/58.06024/60
羟嗪375.2201.0 V166.15030/53
特布他林226.0125.0 V152.02435/24
谱纯
异丙嗪285.186.2 V198.05025/40
沙丁胺醇240.0147.9 V166.06025/19
氨溴索381.0266.0 V185.05027/62
麻黄碱166.0133.0V148.03028/18
溴己新375.0261.9 V I14.15045/27
右美沙芬272.2215.0 V171.06032/50
喷托维林334.3100.1 V145.06030/34
地氯雷他定311.0259.1 V294.110030/25
苯海拉明256.2167.1 V165.05022/25
氯苯那敏275.1230.1 V167.15022/50
氯雷他定383.1337.0 V267.06032/43
溴苯那敏319.0273.9 V167.05027/57
曲吡那敏256.2211.1 V91.15021/50
二羟丙茶碱255.1124.0V181.18443/28
二氧丙嗪317.086.0 V167.07544/60
苯丙哌林310.2126.2 V91.16532/58
茶碱179.0163.9 V122.0-50-38/-26
西替利嗪389.1201.0 V166.15027/55
特非那定472.3436.3 */454.310038/30
氟奋乃静438.2143.1 V171.18038/33
酮替芬310.096.0V82.010027/60
奋乃静404.2171.1 V143.25033/38注：‘表示定量离子。
1.3标准曲线
分别取26种对照品10 mg，精密称定，置10 m L 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，再用甲醇制成含 26种化合物浓度分别为2.5,5,10,20,40 ng.m L—1的标准曲线溶液。
1.4供试品溶液
精密量取样品5 mL，置于50 mL量瓶中，加甲 醇 40 mL，超声（功率 500 W，频率 60 kHz) 20 min,
今日药学2021年3月第31卷第3期
标(y )，各物质浓度（ng ^rn l /1)为横坐标（幻绘制标 准曲线并进行线性回归计算，得相应的标准曲线回 归方程，结果表明各成分在相应的线性范围内线性 关系良好。同时，以峰面积为3倍（SAi = 3)和10倍 (S /n = 10)为检测下限和定量下限，结果见表2。
350
360370
380m/z,Da
400
图1氨溴索（M +H )质谱图
X
106
3.63.02.4
1.81.20.6
0.0
345 355 365 37 385 395 405 415 425 435
m/z,Da
图3溴己新（M +H )质谱图
2.5精密度试验
精密吸取10 ng *mL —1的标准曲线溶液2 pL ，连 续进样6次，测定峰面积并计算其/?S Z )。结果26种 成分的KSZ)U = 6)为1.0%~2.0%，表明该仪器精密 度良好。
2.6重复性试验
取阴性供试品6份，精密加人浓度为丨0吨 的26种混合对照液50 jiL ，分别按“1.4”项方法制备 供试品溶液，进行测定，记录峰面积并计算样品含 量。结果26种成分的/«£>(n = 6)为0.7%~5.5%， 表明该方法重复性良好。2.7 回收试验
取阴性样品，分别加入低、中、高3个浓度共9 份的混合标准溶液进行回收试验，26种成分的回收 率为 61.2%~ 115.6%，满足 GB/T 27404-2008《实验 室质量控制规范食品理化检测》中规定三水平的回 收率在60% ~ 120%的要求。见表3。
Pharmacy Today , 2021 March, Vol. 31 No. 3
• 197 •
放置室温，用甲醇定容至刻度，混匀，用0.22 pm 有 机滤膜过滤，滤液作为待测液。2
结果与讨论
例外管理
2.1流动相选择
分别考察了水相0.1%甲酸、0.5%甲酸、5 m m o 卜I /1 甲酸铵-0.1%甲酸、10 m mo 卜L _1乙酸铵-0.1%甲酸， 有机相甲醇、乙腈，作为流动相对离子化效果的影 响，结果显示，水相提高酸度并未能提高大部分成分 的电离效果，故选择0.1%甲酸，水相加人盐，茶碱、 克伦特罗、苯丙哌林等成分的响应提高，而特布他林 和沙丁胺醇极性较强，在C 18谱反相柱中保留较 弱，因盐调节流动相的pH 值，延迟出峰明显调高了 离子化效率，但增加盐的浓度减低了大部分成分的 离子化效率，故选择5 mmo 卜C 甲酸铵-0.1%甲酸。 乙腈黏度低，洗脱能力较甲醇强，大部分成分的峰型 更尖锐，故选择乙腈。2.2提取方法比较
比较不同的提取方法，50%甲醇、70%甲醇、甲 醇作为提取溶液，超声提取时间1〇,20,30 min ，结果 显示，甲醇作为溶剂，超声处理20 min ，各成分能被 有效提取。
2.3质谱条件的优化
在质谱条件优化中分别考察了离子源电压、接口 温度、雾化器压力、气帘气流量、碰撞气流量等参数对 化合物测定的影响，结果确定的离子源参数为正离子 源电压为5 500 V ，负离子源电压为-4 500 V ，气帘气 流量:36.0 psi ；碰撞气流量:9 P si ；接口温度:550 ^ ; 雾化器压力：40 psi ；辅助加热气流量:45 P si 。对各 化合物测定离子对的参数优化中，氨溴索的分子式 为C 13H 18Br 2N 20，分子量37
8. 1，溴己新的分子式
C ,4Br 2N 20，分子量376.1，两者之间的结构差别
是氨溴索N 上无甲基，环己基上有羟基，两者均含两 个溴离子,79Br 和8lBr 两者在自然界的比例差不多, 则有4种分子结合形式:79 B ，Br 、79 Brs l Br 、81 Br 79 8^8|8/%，因此，氨溴索的质谱图\1+11离子峰有: 377、379、38丨，溴己新的质谱图M +H 离子峰有375、 377、379；两者同时测定，为避免互相干扰，氨溴索选 择381为母离子、溴己新375母离子。M +H 质谱图 见图1~2。
2.4线性关系考察及检测下限、定量下限测定
分别精密吸取标准曲线溶液2 ixL ，按上述谱 质谱条件测得峰面积，并以待测物质峰面积为纵坐
今日药学202丨年3月第31卷第3期
W .
00505
050505
X 5.5.4.4.3.3.2.2.1.1.0.0.S d u *i <l l s u a ;l l 4
表2线性关系考察、检测下限及定量下限测定结果
成分线性范围/ng_mL_1线性方程r检测限/|ig*m L_1定量限/pg*mL
克伦特罗 2.60 〜41.63y=104 368^+107 8180.9990.000 40.002
氯丙嗪 2.75 〜44.037 = 70 015^+64 9790.9990.000 40.002
羟嗪 2.66 -42.63y= 190 353文+240 0390.9970.000 060.000 2
特布他林 2.64 〜42.24y=8 725^+33 9540.9950.0020.007
异丙嗪 2.68-42.86j=88764：r+212 0170.9980.000 10.000 3
沙丁胺醇 2.46-39.28y=54808^+211 9070.9970.0010.003
氨溴索 4.28 ~ 68.4520 259欠+56 6690.9950.000 40.002
麻黄喊 2.65-42.47y=23 063^+24 5180.9990.001 40.005
溴己新 3.34-53.43y=29 430%+1.082 300.9960.000 20.000 7
右美沙芬 2.50-40.06y=13962x+1.019 20.9960.000 10.000 4
喷托维林 2.49-39.91y=103 254x+161 6380.9980.000 090.000 3
地氣雷他定 2.46 〜39.32y=73 991^+44 5940.9980.000 070.000 2
苯海拉明 1.49 〜23.78y=311 247a：+681 1720.9950.000 030.000 1
氯笨那敏 2.45-39.16y=245 775^+370 3800.9960.000 10.000 4
氯雷他定 2.44-38.96r= 105 957^+661 7650.9990.000 30.001
溴笨那敏 2.64 ~ 42.26y=202476^+134 1150.9980.000 20.000 6
曲吡那敏 2.35 ~ 37.65r=407 458^+358 0570.9950.000 090.000 3
二羟丙茶碱 2.44 〜38.96y=4 025^+1 8460.9980.0020.006
二氧丙嗪 2.50-40.00y=75〇44.r+118 1880.9960.000 10.000 3
苯丙哌林 2.98-47.66y=118 184^+391 1220.9980.000 090.000 3
茶碱 2.77-44.32y= 876^+1 5620.9990.0060.02
西替利嗪 3.19 〜51.12y=105 348^+199 1600.9980.000 20.000 8
特非那定 3.25-52.05y= 163 859尤+414 4750.9990.000 20.000 5
氟奋乃静 2.97-47.48y=47619^+75 3830.9980.000 40.002
酮替芬 2.39-38.28y=6l563jt+73 1720.9990.000 080.000 3
奋乃静 3.30-52.87y=86 412^+152 5940.9970.000 90.003
表3阴性样品中26种成分加标回收率和相对标准偏差U= 3)
化合物加标平均回收率/%R S D/%化合物加标量/M<g*iTiL一1平均回收率/%R S D/% |
克伦特罗0.104 182.5 1.1氯苯那敏0.097 988.20.7
0.208 190.10.80.195 881.60.6
0.416 388.6 2.00.391 689.70.5
氯丙嗪0.110 195.5 1.5氯雷他定0.097 4103.9 1.5
0.220 192.1 2.00.194 891.7 1.7
0.440 3103.5 1.70.389 6112.90.9
羟嗪0.106 696.8 1.4溴苯那敏0.105 784.40.8
0.213 286.30.20.211 374.00.9
0.426 3107.7 1.40.422 690.10.7
特布他林0.105 6110.9 1.9曲吡那敏0.094 188.3 1.3
0.211 2110.2 1.10.188 382.1 1.8
0.422 4115.30.80.376 586.90.8
异丙嗪0.107 285.1 1.3二羟丙茶碱0.097 494.8 1.9
0.214 377.0 2.00.194 888.6 1.7
0.428 6103.50.80.389 6109.7 1.9
沙丁胺醇0.098 297.6 1.6二氧丙嗪0.100 062.1 1.9
0.196 495.1 1.00.200 062.9 1.8
0.392 8115.60.50.400 085.50.5
氨溴索0.171 161.2 2.5苯丙哌林0.119 087.1 1.8
0.342 362.4 3.30.238 383.8 1.1
0.684 570.1 2.90.476 6106.70.3
• 198•Pharmacy Today, 2021March, Vol.31No.3今日药学2021年3月第31卷第3期
续表3
少年大学生化合物加标量/p g T n L_l平均回收率/%RSD/%化合物加标量/|xg-niL_1平均回收率/%RSD/%|麻黄碱0.106 292.9 1.9茶碱0.110 881.5 5.5
卫星场强图
0.212 488.4 1.00.221 684.1 1.6
0.424 7109.9 1.30.443 2111.5 1.4
溴己新0.133 690.50.6西替利嗪0.127 8103.40.8
0.267 186.2 1.90.255 692.70.8
0.534 3101.1 1.40.511 2114.1 1.5
右美沙芬0.100 196.7 1.7特非那定0.130 1103.8 1.2
0.200 384.20.40.260 292.0 1.4
高温工业电视0.400 690.1 1.80.520 5113.10.7
喷托维林0.099 892.50.9氟奋乃静0.118 798.0 1.0
0.199 688.50.30.237 487.20.2
0.399 1110.1 1.30.474 8112.60.9
地氯雷他定0.098 391.2 1.4酮替芬0.095 772.5 2.0
0.196 682.1 1.50.191 464.5 1.5
0.393 2105.2 1.80.382 882.4 1.9
苯海拉明0.059 485.50.9奋乃静0.132 295.9 1.4
0.118 976.5 1.70.264 393.20.4
0.237 883.20.70.528 7106.50.5
2.8样品测定
本次检测市售散装凉茶共34批，凉茶种类含: 感冒茶、感冒咽喉茶、口腔茶、咽炎茶、清热解毒茶、祛湿茶、牙痛茶共7类。测定26种成分中,3批样品 共检出5种成分，样品含量见表4。
表4样品含量结果（(jig*mL_1，n=2)
成分4号感冒茶11号感冒茶29号感冒茶
溴已新10.4--
喷托维林--0.2
氯苯那敏 2.80.7-
溴苯那敏 2.5--
茶碱-73-
注：表示未检出。
3结论
本研究建立凉茶中非法添加26种止咳平喘类 化学药物的测定方法。方法在2.5〜40 范围
内呈现较好的线性关系，回收率达到较高水平，灵敏 度高，为凉茶的质量监管提供了有效的检测手段。
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(收稿日期：2020-06-22；在线出版日期：2021 -02-03) Pharmacy Today,2021 March,Vol.31 No.3 *199*
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