郑荣;茹歌;陈静;陈丹丹;钟吉强;王柯
【摘 要】为建立测定化妆品中双酚A的液相谱-质谱法,将样品经甲醇-氨水混合溶液提取,以Waters BEH C18柱(2.1 mm×5 cm×1.7μm)为谱柱,以甲醇为流动相A相,以含5 mmol/L醋酸铵的水溶液为流动相B相,梯度洗脱,柱温40℃,流速0.25 mL/min,以多反应离子监测模式进行监测,内标法定量.结果表明,双酚A在0.2～50 ng/mL质量浓度范围内,线性关系良好,相关系数r>0.995,检出限为0.005μg/g,平均回收率为85.5％ ～104.7％,精密度为0.9％ ～2.0％.该方法快速简便,适用于化妆品中双酚A类物质及其衍生物的快速筛查. 【期刊名称】《香料香精化妆品》
【年(卷),期】2018(000)006
【总页数】4页(P46-49)
【关键词】双酚;A化妆品;液相谱-串联质谱法
【作 者】郑荣;茹歌;陈静;陈丹丹;钟吉强;王柯
【作者单位】上海市食品药品检验所,上海 201203;上海市食品药品检验所,上海 201203;上海市食品药品检验所,上海 201203;上海市食品药品检验所,上海 201203;上海市食品药品检验所,上海 201203;上海市食品药品检验所,上海 201203
【正文语种】中 文
双酚A（BPA），化学名2,2 - 二（4 - 羟基苯基）丙烷，简称二酚基丙烷，是重要的有机化工原料，苯酚和丙酮的重要衍生物，主要用于生产聚碳酸酯、环氧树脂、聚砜树脂、聚苯醚树脂等多种高分子材料。也可用在增塑剂、阻燃剂、抗氧剂、热稳定剂、橡胶防老剂、农药、涂料等精细化工产品中。它还大量应用于生活塑料制品中，包括饮用水瓶、婴儿奶瓶等。BPA 的毒性效应主要包括内分泌干扰物、神经毒素、免疫毒素等方面，这些致毒效应甚至会增加细胞癌变、畸变的可能性[1]。双酚A有模拟雌激素的效果[2-3]，低剂量的双酚A也能使动物产生雌性早熟、精子数下降、前列腺增长等作用。有资料显示双酚A 具有一定的胚胎毒性和致畸性，可明显增加动物卵巢癌、前列腺癌、白血病等病症的发生 [4]。孕妇在妊娠早期受双酚A影响可能会导致婴儿感染哮喘，甚至严重干扰人类和动物的生殖遗传
功能。我国《化妆品安全技术规范》2015年版明确规定双酚A为化妆品中的禁用物质，但尚未收载检验方法。图1列出了双酚A的化学结构式。
图1 双酚A化学结构式
目前双酚A的检测方法主要有液相谱法 [5- 7]、液相谱 - 串联质谱法[8-10]、气相谱法 [11]等，涉及食品、生物、环境等样品基质[12]。化妆品中的双酚A的检测方法主要有SN/T 3822—2014和GB/T 30939—2014，前者采用液相谱荧光检测法测定化妆品中的双酚A，检出限为0.1 mg/ kg，无法满足日常监管的需求，且阳性样品仍旧需要采用质谱进行确证。后者采用液相谱 - 质谱法测定双酚A，外标法定量，检出限为0.025 mg/kg，由于化妆品基质复杂，部分样品基质效应较为严重，采用外标法测定，会出现基质干扰、回收率偏低等现象，进而导致假阴性的结果。本文对谱/质谱条件进行了优化，采用内标法进行测定，提高了方法灵敏度，有效保障了测定结果的准确可靠。
1 材料与方法
1.1 仪器和试剂
液质联用仪（Waters UPLC/AB API4500，美国AB公司）、电子天平（精度十万分之一、万分之一，瑞士梅特勒 - 托利多公司）、超声仪（BRANSON，美国EMERSON公司）、MS3涡旋混合器（德国IKA公司）、5810R型台式离心机（德国Eppendof公司），Milli - Q超纯水器（美国Millipore公司）。
沙芦草谱纯甲醇（CH3OH）购自德国默克公司；分析纯氨水（NH 3）购自上海凌峰化学试剂有限公司；分析纯乙酸铵（CH 3COONH4）购自德国默克公司；双酚A标准品（纯度99.8%）购自Dr.E公司；双酚A -D4（内标）（纯度98.5%）购自挪威CHIRON公司。
1.2 标准溶液的配制
精密称取双酚A标准品10 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制得双酚A标准储备溶液（1 mg/mL）。精密吸取双酚A标准储备溶液0.1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，制得质量浓度为1 μg /mL的双酚A工作溶液。精密吸取双酚A工作溶液0.1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，制得双酚A标准中间溶液（100 ng /mL）。
精密称取双酚A - D4 适量，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀制得1 μg /mL的内标工作溶液。
viki郭希
分别精密吸取双酚A标准中间溶液0.02、0.1、0.5、1和2 mL，置10 mL量瓶中，各精密加入内标工作溶液0.1 mL，制得质量浓度分别为0.2、1、5、10和20 ng/mL的系列标准溶液（内标含量均为10 ng/mL）。
曲金华1.3 供试液的制备
准确称量样品约1.0 g（准确至1 mg），置于25 mL比管中，加入250 μL内标工作溶液（1 μg / mL），再加入甲醇溶液（含质量分数0.1%氨水）至刻度，涡旋混匀，超声提取30 min，4 500 r/min离心5 min，取上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为待测液备用。
1.4 谱和质谱条件
谱柱：Waters BEH C18（2.1 mm × 5 cm ×1.7 μm）；流动相：以甲醇为流动相A相，以含5 mmol/L醋酸铵的水溶液为流动相B相，按表1进行梯度洗脱；柱温：35 ℃；进样量：5 μL；流速：0.25 mL/min。
表1 梯度洗脱程序时间/min A相体积分数/% B相体积分数/%0.0 80 20 2.0 10 90 5.0 0 100 7.0 0 100 7.1 80 20 12.0 80 20
刘美纯离子源：电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应离子监测模式（MRM）。其他参考质谱条件详见表2。
表2 参考质谱条件物质名称 去簇电压/V 定量离子对 碰撞能量/V 定性离子对 碰撞能量/V双酚A -3 100 227.0/132.9 -336 227.0/210.9 -38双酚A - D4 -380 230.8/215.0 -342 / /
2 结果
2.1 测定方法的考察
实验中曾尝试了液相谱法和液质联用外标法进行化妆品中双酚A的检测。结果表明，液相谱法灵敏度较差，由于双酚A的紫外光谱图容易受化妆品中的基质干扰，荧光检测器的方法无法解决阳性确证的问题，结果容易出现假阴性，无法满足监管需求，故选用液相谱 - 质谱法进行准确定性。
分别采用了外标法和内标法进行测定，结果表明，外标法基质效应明显，不同基质样品测定回收率结果为36.2% ～ 110.3%，部分样品回收率较低，定量结果误差较大。改用内标法定量，不同基质样品回收率结果均介于85% ～ 115%之间，重复性试验结果偏差均小于5%。
有文献报道采用甲醇 - 质量分数0.1%氨水为流动相，实际检验中发现将流动相修改为甲醇 -5 mmol/L乙酸铵的水溶液梯度洗脱，可提高离子对的响应，有效提高检测方法灵敏度。
2.2 不同仪器的考察
实验中分别考察了Agilent 6495和Waters AB4500高效液相质谱联用仪，发现不同品牌质谱仪由于性能上的差异，质谱条件会存在一定的差异，需要各实验室在测定前进行条件优化。表3给出了Agilent 6495的参考质谱条件。
离子源：AJS ESI；气体温度：210 ℃；干燥气流速：17 L/min；雾化气：5 psi；碰撞气（Ar）：230 k Pa；鞘气加热温度：400 ℃；离子化电压：3 000 V。
表3 Agilent 6495参考质谱条件物质名称 定量离子对 碰撞能量/V定性离子对 碰撞能量/V双
酚A 227.2/132.8 28 227.2/212.0 20双酚A - D4 230.99/216 20 / /
2.3 方法特异性谱纯
取膏霜乳液类、液态水基类、凝胶类3种空白基质样品进行分析，结果表明，在选定的实验条件下，空白基质中其他成分对双酚A的测定无干扰。
需要注意，部分品牌塑料实验器皿有可能带入干扰，需同时进行空白试验确认无干扰，必要时可采用玻璃器皿进行样品前处理。此外，在液相泵和进样器六通阀之间连接双酚A补集柱（Agilent EC- C18，4.6 mm × 5 cm × 2.7 μm），可有效去除流动相管路中的双酚A的干扰。
2.4 线性范围与检出限
取双酚A系列标准溶液，分别进样5 μL，以双酚A峰面积与内标峰面积之比作为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果表明，双酚A在0.2 ～ 20 ng/mL浓度范围内，线性关系良好，线性方程为Y = 0.0136X + 0.00549，相关系数0.9954。
>宋嘉宝
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