第3O卷第15期
2005年8月
中国中药杂志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
V o1.3O,Issue15
August,2005
四物汤对放射线致血虚证小鼠骨髓Epo和
G—CSF基因表达的影响
郭平一，梁乾德，胡剑江2，王继峰2，王升启卜
(1.军事医学科学院放射医学研究所，北京100850;2.北京中医药大学，北京100029)
[摘要]目的：考察四物汤对放射线致血虚证小鼠的生血作用及对骨髓Epo,G-CSF基因表达的影响，为阐明
四物汤补血作用的分子机制提供依据.方法：采用3.5Gy∞Co’/射线全身1次性照射，制备小鼠血虚证模型；检测外
周血象；骨髓集落培养观察并计数CFU—GM,BFU.E,CFU.E,CFU.mix;RT-PCR检测骨髓Epo和G-CSF基因表达.结
果：四物汤显着升高放射线致血虚证小鼠外周血白细胞数量和骨髓CFU—GM,BFU.E,CFU.E,CFU—mix数量，上调骨
髓Epo和G-CSF基因表达.结论：四物汤促进骨髓细胞Epo和G-CSF 基因的表达可能是其生血作用的机制之一.
[关键词]四物汤；辐射；血虚证；造血祖细胞；造血生长因子；骨髓；逆转录一聚合酶链反应
支撑架设计
[中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1001.5302(2005)15—1173—04
血虚证是中医临床常见证候，表现为血液亏虚,
脏腑百脉失调，全身虚弱.四物汤由熟地黄，当归,
白芍，川芎4味药组成，是经典的补血方剂.近年来
对四物汤及其活性单体的补血作用及其机制已进行
了较广泛的研究【1.2J.为了进一步从基因水平上阐
明四物汤的作用机制，本研究用印Coy射线照射制
作小鼠血虚证模型，观察了四物汤的生血作用及对
骨髓红细胞生成素(Epo)~l粒细胞集落刺激因子(G.
CSF)基因表达的影响.
1材料
1.1药物四物汤的4味药熟地黄，当归，白芍和
川芎均购自北京同仁堂中药厂，由本所九室马百平
教授鉴定.按《太平惠民和剂局方》规定的剂量比
(15:10:10:6)称取.按人用药剂量计算【3j小鼠用药
剂量为10g?kg?d～.经水煎，过滤，浓缩，配制成
100%药液(即每1mL药液含生药1g).4℃保存备
用.
大庆油田宽带1.2主要试剂与仪器TRIZOL,OligodT,dNTP等
购自Gibeo公司.AMV逆转录酶,DNA合成酶,
RNase抑制剂等购自Promega公司.Epo,IL-3及,J.
[收稿日期]2004.10.10
[基金项目]国家自然科学基金项目(30271617)；军队”十五”重点项目(0172)19)；北京市”二四八”重大创新工程项目(HO10210220113)
【通讯作者]王升启,Tel:(010)66932211,Fax:(010) 66932211,E—mail=**************.ac.(311_
谷氨酰胺购自Sigma公司.甲基纤维素购自What.
mall公司.IL-11为重庆多泰产品.G.CSF为日本麒
麟株式会社产品.DU640核酸蛋白紫外分析仪购自
Be&man公司.GelDoe1000凝胶成像仪为BIO.RAD 产品.DNA合成仪为PE公司产品.Sysmex一820
自动血细胞计数仪购自日本.
琼脂糖凝胶1.3动物C57BL/6J小鼠，雌性,60只,6～8周龄,
体重(20-4-2)g，由中国医学科学院实验动物中心提
供.随机分为3组：正常对照组，模型对照组和四物
汤组.每组2O只.
2方法
2.1动物造模及给药小鼠常规饲养数天适应环
境后，模型对照组和四物汤组采用60Co7射线全身1 次照射，照射剂量3.5Gv，剂量率1.60Gy?min～，制
成血虚证模型.照射后小鼠立即灌胃，四物汤组灌
以四物汤药液，每次0.2mL，每日1次；正常对照组
和模型对照组灌以等量生理盐水.连续灌胃7d.
2.2外周血象检测每组分别取l0只小鼠，于造
模后第3,5,7,l0,13天分别由尾静脉取血20，检
N~’t-周血白细胞数.
2.3造血祖细胞培养造模后第7天每组分别取4
只小鼠，颈椎脱臼处死，无菌取骨髓，按文献[4]报道
进行集落培养，观察并计数粒细胞.巨噬细胞集落形成单位(CFU.GM)，爆裂型红细胞集落形成单位(BFU.E)，红细胞集落形成单位(CFU.E)，混合集落
形成单位(cFU—mix).
1173?
第30卷第l5期
2005年8月
中国中药杂志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
V0l3O.Issue15
August,2005
2.4逆转录一聚合酶链反应于最后一次灌胃24h 后，每组分别取6只小鼠，颈椎脱臼处死，取股骨骨髓.按照TRIZ()L⑩试剂说明提取骨髓总RNA.采用两步法逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR).
逆转录：取RNA2.5g，含量为1g?rnI.的喷雾干燥塔
oligodT2.5，用DEPC处理水补足体积至12.5季正雄
ncs
,70℃水浴60min，冰浴放置5min，加至反应体系(含5×AMV/Tfl反应缓冲液10,25mmol?L～Mg—cl21OL,10mmol?L一.dNTP2.
5L,RNase抑制剂
1.25,AMV
2.5,DEPC处理水补足体积至37.5 )，室温放置5min,42℃水浴62min,70℃水浴15 ITIIRo
聚合酶链反应:20反应体系，含逆转录产物
1L,PCRmix15L,raqDNA合成酶0.2L,100mg
L上，下游引物各0.5L，去离子水补体积至20
.振荡混匀，上机反应，以—aetin为内参照.PCR
参数:94oC,5min;94℃变性30S,55oC复性30S,72
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
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