干预完成的细胞先用D-Hanks液将培养液冲洗干净，以免影响荧光亮度，再用Rhodamine123（R-123；Molecular Probes，溶于DMSO）孵浴，终浓度10μg/ml，避光，37℃， 孵育30min；然后再用D-Hanks液将未被细胞吸收的R-123冲洗净，就可以在激光共焦显微镜下检测R-123荧光。R-123荧光用激光共焦显微镜（Leica SP-1 USA）在488nm时激发并且在530nm时检测。 一、检测原理：
罗丹明123（Rhodamine 123）是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，是一种线粒体跨膜电位的指示剂。其在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质,荧光强度减弱或消失。而在凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃, Rh123 重新释放出线粒体, 从而发出强黄绿荧光，可用荧光显微镜、荧光光度计或流式细胞仪检测，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。 二、 使用方法：
1．细胞染及分析
（1）培养细胞1×106/mL重悬于培养基中；
（2）加入罗丹明123染液0.1μg/mL～50 μg/mL （根椐细胞种类不同而浓度不同，一般3～10 μg/mL）；
（3）37℃，5% CO2细胞培养箱孵育1～30 min（根椐细胞种类不同而不同，一般10 min）；
（4）离心以培养基洗细胞两次；
隐面人（5）重悬细胞于培养基中，37℃，5% CO2培养60 min；
（6）流式细胞仪检测：激发波长488～505nm，发射波长515～575 nm （一般为530nm）；
荧光显微镜观察：滴加100 μL上述混合液于载玻片上，激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm观察，拍照。
时间膨胀2． 组织提取的线粒体染及分析
（1）按常规方法提取的线粒体，用适量的1×Assays Buffer（将5×Assays Buffer 用水稀释5倍）重悬；
（2）常规方法进行蛋白含量测定后，用1×Assays Buffer调配成3mg/mL的线粒体溶液；
（3）取2mL 1×Assays Buffer和1mL线粒体溶液；
（4）加入适量待测化合物（同时设空白对照组），250C保温min；
（5）加入罗丹明123染液10 μL；
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（6）荧光光度计检测：上述混合液全部加入石英比皿中，置于25徐玉凤0C下测定，激发波长488～505nm，发射波长530nm，连续记录从0 min～30 min内荧光强度的变化。
三、储存 溶液置于－200C，可保存一年。
网络安全事件管理细胞凋亡后用罗丹明123染线粒体跨膜电位坚持可持续发展战略，荧光强度是降低的. 罗丹明123是阳性染料，可以与具有高的负电性膜电位的线粒体所结合，当凋亡时，去极化膜电位降低，故结合减少，所检测到的荧光强度减弱
牛磺酸组线粒体膜电位均升高
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