食品中罗丹明B的测定
BJS 201905
1 范围
本方法规定了食品中罗丹明B的液相谱测定方法及液相谱-质谱/质谱确证方法。 本方法适用于半固态调味料、花椒及花椒粉、花椒油、牛肉干、蜜饯、水果干制品中罗丹明B的测定和确证。
2 原理
试样中罗丹明B用含酸的甲醇水溶液提取后，经混合型阳离子固相萃取小柱净化，采用液相谱荧光检测器检测，外标法定量。试样中检出罗丹明B后采用液相谱质谱/质谱法进行确证。 3 试剂和材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。
3.1 甲醇（CH3OH）：谱纯。
3.2 乙腈（C2H3N）：谱纯。
3.3 甲酸（CH2O2）：谱纯。
3.4 氨水（NH₃·H₂O）：谱纯。
3.5 含0.1%甲酸的水溶液: 取甲酸（3.3）1 mL用水稀释至1000 mL， 用滤膜（0.22 μm，水相）过滤后备用。
3.6 50%甲醇水溶液:准确量取500 mL甲醇（3.1）于1 L容量瓶中，用水定容至刻度。青春在风中飘着
3.7 含0.1%甲酸的甲醇水溶液：取1 mL甲酸（3.3），用甲醇水溶液（3.6）稀释至1000 mL。
3.8 含0.1%甲酸的乙腈溶液：取1 mL甲酸（3.3），用乙腈（3.2）稀释至1000 mL，滤膜（0.22 μm，有机相）过滤后备用。
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3.9 含0.1%甲酸的乙腈水溶液：取0.1 mL甲酸（3.3）和35 mL乙腈（3.2），用水稀释至100 mL，混匀。
3.10 含5%氨水的甲醇溶液：取5 mL氨水（3.4），用甲醇稀释至100mL，混匀。（临用现配）
3.11 罗丹明B标准品：
罗丹明B标准品的分子式、相对分子量、英文名称、CAS登录号见表1，纯度≥99%。
表1 罗丹明B标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
中文名称 | 英文名称 | CAS登录号 | 分子式 | 相对分子量 |
罗丹明B | Rhodamine B | 助产学 81-88-9 | C28H31ClN2O3 | 479.01 |
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3.12 罗丹明B标准储备液：准确称取罗丹明B标准品10 mg（精确至0.0001 g），置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成浓度为100 μg/mL的标准储备液。溶
液转移至试剂瓶中，置于-18℃避光保存，有效期为6个月。 3.13 中间标准溶液：准确移取0.5 mL罗丹明B标准储备液（3.12）于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，此溶液的浓度为500 ng/mL。置于4℃避光保存，有效期为1个月。
3.14 标准工作溶液：用含0.1%甲酸的乙腈水溶液（3.9）将中间标准溶液（3.13）稀释成0.0 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL的标准工作溶液。临用现配。
3.15 混合型阳离子固相萃取柱（60 mg/3mL）：基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，或相当者。使用前依次用3 mL甲醇，3 mL水活化。
3.16 陶瓷均质子。
4 仪器和设备
4.1 液相谱仪：配荧光检测器。
4.2 液相谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI源）。
4.3 旋涡混合器。
4.4 离心机：转速≥8000 r/min。
4.5 电子天平：感量分别为0.0001 g和0.01 g。
4.6 具塞离心管：50 mL。
4.7 组织捣碎机。
4.8 固相萃取装置。
5 试样制备与保存
5.1 半固态调味料
取适量样品，捣碎，混匀，常温保存备用。
5.2 花椒及花椒粉
取适量样品，粉碎后过40目筛，常温保存备用。
5.3 花椒油
充分混匀，常温保存备用。
5.4 牛肉干
取适量样品，捣碎，混合均匀，冷藏保存备用。
5.5 蜜饯、水果干制品
取适量样品，捣碎，混合均匀，冷藏保存备用。
6 测定步骤
孩子我为什么打你阅读答案6.1 试样前处理
提取：准确称取2 g（香辛料样品称取1 g，精确至0.01 g）辜鸿鸣试样置于50 mL塑料离心管中，准确加入10.0 mL含0.1%甲酸的甲醇水溶液（3.7），混匀，加入陶瓷均质子两颗（调味油
试样除外），于旋涡混匀器上涡旋15 min，于8000 r/min离心10 min，取3 mL提取液层溶液过0.45 μm有机相滤膜后待净化。
净化：准确移取1.0 mL提取液（6.1.1）至固相萃取柱（3.15）中，依次用3 mL 0.1%甲酸水溶液（3.5）、3 mL水、3 mL甲醇淋洗固相萃取柱。用6 mL氨水甲醇溶液（3.10）洗脱目标物，并收集洗脱液，洗脱溶液在45℃下，用氮气吹至近干，2012重庆高考作文残渣用1.0 mL 0.1%含酸的乙腈水溶液（3.9）溶解（香辛料样液残渣用0.5 mL溶解），过0.22 μm有机相滤膜上机测定。
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