T/GDFCA 083—XXXX
ICS 67.05
CCS X
04
GDFCA
食品中吡咯里西啶类生物碱含量的测定高
效液相谱/串联质谱法
Determination of pyrrolizidine alkaloids in food by Liquid chromatography -tandem
mass spectrometry
（征求意见稿）
（本草案完成时间：2022-6-3）
在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。 2022-XX -XX 发布2022-XX -XX 实施
目次
前言............................................................................II 1范围 (1)
2规范性引用文件 (1)
3术语和定义 (1)
4原理 (1)
5试剂和材料 (1)
is曲线
6仪器和设备 (2)
8分析步骤 (2)
9结果计算（请无限极确认） (4)
10灵敏度、准确度和精密度 (5)
附录A（资料性）22种生物碱的名称及简称、CAS号、结构式、分子式及相对分子量 (6)
附录B（资料性）基质加标标准溶液（10μg/kg上机浓度）谱图 (8)
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由广东省食品流通协会提出并归口。
本文件起草单位：
本文件主要起草人：
本文件为首次发布。
食品中吡咯里西啶类生物碱含量的测定高效液相谱/串联质谱法1范围
本文件描述了用高效液相谱/串联质谱测定食品中22种吡咯里西啶类生物碱含量的方法，包括方法的原理、试剂、仪器和设备、试样制备、分析步骤、结果计算、精密度等要求。
本文件适用于植物性食品中吡咯里西啶类生物碱的测定，植物性中药材可参照执行。
2规范性引用文件
传感器与微系统下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
吡咯里西啶类生物碱pyrrolizidine alkaloids,PAs
自然肌理
一类天然的植物毒素，主要分布于菊科、豆科和紫草科等植物中。吡咯里西啶类生物碱本身不具有毒性，主要是其二级代谢产物代谢性吡咯对人体肝脏有毒害作用。
4原理
试样经提取液超声提取，离心后取部分提取液过固相萃取柱净化、氮吹浓缩、复溶，经微孔滤膜过滤，用高效液相谱串联质谱仪测定，保留时间和特征离子对定性，外标法定量。 5试剂和材料
除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。
甲醇，谱纯
10%甲醇水溶液：10mL甲醇（5.1），90mL水，混匀备用。
94gay氨水，优级纯
5%氨水甲醇溶液：准确吸取5mL氨水（5.3）用甲醇（5.1）定容到100mL。
自己的花是让别人看的教学反思
甲酸，谱纯
0.1%甲酸水溶液：准确吸取0.5mL甲酸（5.5）加入至500mL甲醇中。
0.1%甲酸甲醇溶液：准确吸取0.5mL甲酸（5.5）加入至500mL甲醇中。
超纯水（电阻率≥18.2MΩ•cm）
生物碱标准品：22种生物碱中文名称、英文名称及其简称、结构式、分子式、相对分子质量参见
附录A的表A.1，均为有证标准物质，纯度≥95％。
0.1mg/mL生物碱储备液：精密称取每种PA标准物质10mg，用甲醇溶解配制成质量浓度为
0.1mg/mL的标准品储备液，于−20℃密封保存，有效期6个月。（所有试剂溶液有效期请无限极确认）
混合标准溶液：分别准确吸取每种标准储备液（5.10）各1.00mL于100mL容量瓶中，用甲醇
稀释至刻度，配制成质量浓度为1.00μg/mL混合标准品溶液，于4℃避光保存，有效期1个月。
微孔滤膜：0.22μm，有机相。
6仪器和设备
高效液相谱-串联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）；
电子天平：感量为0.0001g和0.01g；
刘爱勤
低温高速离心机：转速不低于5000r/min；
超声波清洗器；
氮气吹干仪；
固相萃取装置；
混合型阳离子交换固相萃取柱（Oasis MCX或同等柱效的萃取柱，6mL/500mg）
7试样的制备
7.1.1固态试样
将植物性固体试样用四分法缩至50g～100g，经粉碎机粉碎，全部通过60目标准筛，混匀，装入洁净容器，密封，并标明标记，于常温储存备用。
7.1.2半固态试样或液态试样
将其充分搅拌均匀，分出50g～100g作为试样。制备好的试样装入洁净容器，密封，并标明标记，于常温储存备用。
8分析步骤
样品提取
称取2.00g（精确至0.01g）试样于250mL锥形瓶，加入95％甲醇水溶液40mL，在室温下超声提取20min，以6000r/min离心10min，移取上清液至250mL烧杯，40℃水浴挥发至5mL，为待净化液。
样品净化
8.2.1活化：依次用5mL甲醇和5mL超纯水活化固相萃取柱，保证固相萃取柱柱头浸润。
8.2.2淋洗：准确量取1.00mL待净化液（8.1）上样，依次用5mL超纯水和5mL甲醇淋洗两次，弃去淋洗液。
8.2.3洗脱：用4mL5％氨水甲醇溶液（5.5）洗脱富集后的固相萃取柱，并用接收管接收洗脱液。
8.2.4浓缩：将上述洗脱液在40℃条件下氮吹浓缩至低于0.5mL近干，为待复溶样品。
样品复溶
待复溶样品用10％甲醇水溶液（5.3）溶解准确定容至1.0mL，过0.22μm滤膜，待测定。
基质匹配标准曲线绘制
取空白试样，按上述方法处理制得其空白基质溶液，准确量取混合标准溶液适量，用空白基质溶液稀释成浓度为0.1μg/L、0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L和20.0μg/L的基质匹配混合标准工作溶液，临用现配。供液相谱-串联质谱仪测定。以上述溶液中各生物碱的浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
仪器参考条件
8.5.1谱参数
a)谱柱：BEH C18（2.1mm×100mm,1.7μm）或性能相当者；
b)流速：0.3mL/min；
c)柱温：40℃；
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