残留量
沈亚飞1，徐长亮2，郝国辉3，卞 军4*
（1.江苏省宿迁市泗洪县梅花镇农业农村工作局，江苏宿迁 223954；
2.江苏省宿迁市农畜产品质量检测中心，江苏宿迁 223800；
3.江苏省农产品质量检验测试中心，江苏南京 210036；
4.江苏省宿迁市宿豫区农产品质量检验检测中心，江苏宿迁 223800）
摘 要：本文建立了一种利用液相谱串联质谱法检测水稻中三氟苯嘧啶残留量的方法。结果表明，该方法的准确度和精密度满足《合格评定化学分析方法确认和验证指南》（GB/T 27417—2017）质量控制要求，使用该方法检测水稻中三氟苯嘧啶的方法定量限为0.03 mg·kg-1，为检测水稻中三氟苯嘧啶残留量提供新的方法。
关键词：三氟苯嘧啶；水稻；液相谱串联质谱法
Determination of Trifluorouracil Residue in Rice by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry
SHEN Yafei1, XU Changliang2, HAO Guohui3, BIAN Jun4*
(1.Bureau of Agriculture and Rural Affairs of MeiHua Town, Sihong County, Suqian 223954, China; 2.Agricultural and Animal Products Quality Testing Center, Suqian 223800, China; 3.Agricultural Product Quality Inspection and Testing Center, Nanjing 210036, China; 4.Agricultural Product Quality Inspection and Testing Center, Suyu District,
Suqian 223800, China)
Abstract: A method for the determination of trifluoropyrimidine residues in rice by liquid chromatography-tandem mass spectrometry was developed. The results showed that the accuracy and precision of the method met the quality control requirements of the GB/T 27417—2017. The limit of quantification of the method for the determination of trifluorouracil in rice was 0.03 mg·kg-1, which provided a new method for the determination of trifluorouracil residues in rice.
Keywords: riflumezopyrim; rice; liquid chromatography-tandem mass spectrometry
三氟苯嘧啶对飞虱等同翅目害虫及其传播的病毒具有很好的防控效果，可用于水稻、玉米、马铃薯、棉花和大豆等作物在大田栽培过程中的虫害防治。水稻是我国的重要粮食作物，遏制虫害、保护水稻稳产、高产是影响国计民生的大事[1]。稻飞虱是水稻生产中的主要害虫之一[2]，晚稻后期，稻飞虱难治，这是因为发生频次多且稻飞虱对大部分新烟碱类杀虫剂、吡蚜酮、噻嗪酮等产生了较高的抗性[3]。三氟苯嘧啶是新型介离子类杀虫剂，具有安全、高效的特点[4]，对水稻褐飞虱和白背飞虱有特效，可用于该类害虫的抗性管理。但是，在环境行为上，有研究发现三氟苯嘧啶在pH值4～9的水中的稳定性较好，几乎不会发生水解，因此具有污染地下水的潜在风险[3]。因此，准确检测三氟苯嘧啶的产品及其环境中的残留量，为环境及膳食风险评估提供准确数据尤为重要。本文采用液相谱串联质谱仪，通过母离子、子离子以及多重反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）扫描方法，摸索出相应的离子对信息以及优化相关的质谱参数，建立三氟苯嘧啶残留检测的方法，为进一步分析和评价其在其他产品和环境中的残留 作者简介：沈亚飞（1991—），男，江苏泗洪人，本科，助理农艺师，研究方向：农产品质量安全检测和监管。
通信作者：卞军（1979—），男，江苏宿迁人，本科，高级农艺师。研究方向：农产品质量安全检测和监管。E-mail:422462572@ qq。
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分析检测
提供技术支撑。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
长江三峡水利枢纽安全保卫条例液相谱质谱联用仪：三重四极杆液相串联质谱仪Waters TQS，美国Waters 公司；高速离心机：TG1650-WS，上海卢湘仪离心机仪器有限公司；电子天平：感量0.01 mg、0.01 g，梅特勒-托利多公司；高速匀浆机：IKA-T19，德国IKA公司。
三氟苯嘧啶标准品：纯度≥96.0%，Anpel公司；氯化钠：分析纯；无水硫酸镁：分析纯；乙腈：HPLC级别，CNW；甲酸：HPLC级别，CNW；乙酸铵：HPLC级别，CNW；QUECHERS净化管：50 mg无水硫酸镁和100 mg PSA-C18（Agilent，质量比1∶1）；一次性注射器（5 mL）以及针式滤器（直径13 mm，滤膜孔径0.22 μm，CNW）均采购自上海安谱实验科技股份有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 仪器条件
流动相（有机相）：乙腈；流动相（水相）：5 mmol 乙酸铵水溶液（含0.1% 甲酸）；梯度洗脱程序见表1；谱柱：C18谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）；离子源：电喷雾离子源（正离子模式）；谱柱温：40 ℃；流动相流速：0.30 mL·min-1；进样量：1 μL；干燥气温度：500 ℃；干燥气流速：1 000 mL·min；离子源温度：150 ℃；三氟苯嘧啶的定性离子对：399/121，定量离子对：399/279[5]。
表1 液相谱梯度洗脱程序延续性
时间/min流动相A/%流动相B/% 0955
1955
2595
3595
4955
5955
1.2.2 样品制备
称取水稻样品5 g（±0.01 g）于离心管中，加入5 mL纯水浸润混匀并过夜，再加入1 g NaCl、2 g无水MgSO4和5 mL乙腈进行匀浆，然后用离心机在6 000 r·min-1条件下离心5 min，取上清液2 mL，加入含50 mg无水MgSO4和100 mg PSA-C18（质量比1∶1）的QUECHERS净化管，振荡混匀后再于6 000 r·min-1下离心5 min，使净化填料于上清液彻底分离；取1 mL上清液在50 ℃水浴下氮吹至近干，用1 mL谱纯乙腈复溶解，溶液过0.22 μm有机滤膜，
使用三重四极杆液相串联质谱仪进行分析[5]。
1.2.3 标准溶液制备以及标曲绘制
称量一定量的三氟苯嘧啶标准品配制三氟苯嘧啶标准储备液，浓度为155 mg·L-1，并根据《实验室质量控制规范食品理化检测》（GB/T 27404—2008）[6]要求进行保存。用微量注射器和移液管移取三氟苯嘧啶标准储备液并配制成质量浓度分别为0.031 mg·L-1、0.078 mg·L-1、0.155 mg·L-1、0.248 mg·L-1和0.310 mg·L-1的三氟苯嘧啶标准工作溶液（用基质溶液进行配制），按照1.2.1 所述仪器条件测定三氟苯嘧啶含量，并根据浓度拟合其标准曲线方程，确定回归系数是否满足GB/T 27417—2017对定量分析的相关系数的要求。
2 结果与分析
2.1 三氟苯嘧啶定性和定量离子流图
本实验采取正离子扫描反应离子检测模式检测三氟苯嘧啶。三氟苯嘧啶总离子流图、定量离子及定性离子图中的保留时间均为1.89 min，由定量离子和定性离子组成的提取离子流图见图1。
2.2 三氟苯嘧啶标准曲线
由图2可知，三氟苯嘧啶的线性回归方程为y=85.529 1x+3 388.93。该标准曲线由5个校准点组成，线性回归方程相关系数为0.997，符合《合格评定化学分析方法确认和验证指南》（GB/T 27417—2017）[7]中相关系数不低于0.99的规定。
2.3 三氟苯嘧啶定量限分析
在未检测到三氟苯嘧啶残留的水稻中添加三氟苯嘧啶，使水稻样品中三氟苯嘧啶理论添加浓度分别为0.01 mg·kg-1、0.02 mg·kg-1、0.03 mg·kg-1、0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1和0.50 mg·kg-1，每个添加水平做5个平行实验，按照方法1.2.2进行样品制备（表2）。当添加浓度小于0.03 mg·kg-1时，仪器的信噪比不能满足定量检测要求，无法获得稳定的回收率，因此选择0.03 mg·kg-1作为其最低定量限。此外，当添加浓度为0.03 mg·kg-1时，样品中的回收率为90%～110%，相对标准偏差为5.78%，满足《合格评定化学分析方法确认和验证指南》（GB/T 27417—2017）中相关要求，因此方法认定三氟苯嘧啶在水稻中的方法定量限为0.03 mg·kg-1。
2.4 三氟苯嘧啶精密度及准确度分析
对添加浓度为0.05 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1的3组样品（每个样品5个重复）经前处理后上机检测，回收率和相对标准偏差结果见表3。当添加浓度为0.05 mg·kg-1时，平均回收率
MRM of 3 channels,ES+
399.003 > 121.015
20200407-BS2 Smooth(Mn,5x2) D100-S-99
MRM of 3 channels,ES+
399.003 > 278.983
20200407-BS2 Smooth(Mn,5x2) D100-S-99
图1 三氟苯嘧啶定性和定量离子流图
020406080
100120140三氟苯嘧啶浓度/μg·L -1
160180200220240260280300
峰面积
5 000
10 00015 00020 000
25 000图2 三氟苯嘧啶标准溶液拟合曲线表2 方法定量限确定数据分析
重复样品编号
理论添加浓度/mg·kg -1
检出值/mg·kg -1
回收率/%相对标准偏差/%
CF -10.03
0.033110 5.78CF -20.030100CF -30.02893CF -40.02993CF -5
0.027
90
表3 三氟苯嘧啶在水稻中的添加回收结果分析
样品编号本底值/mg·kg -1添加水平/mg ·kg -1实测值/mg·kg -1平均值/mg ·kg -1回收率/%平均回收率/%相对标准偏差/%TJ -0.05-10
0.050.045 70.046
91.491.5
4.14
TJ -0.05-20.050.044 5 89.0TJ -0.05-30.050.043 987.8TJ -0.05-40.050.045 891.6TJ -0.05-50.050.048 897.6TJ -0.1-100.100.0910.08991.089.2 1.66
TJ -0.1-20.100.09090.0TJ -0.1-30.100.08989.0TJ -0.1-40.100.08787.0TJ -0.1-50.100.08989.0TJ -0.5-100.500.5150.518103.0101.4
1.24
TJ -0.5-20.500.508101.6TJ -0.5-30.500.510102.0TJ -0.5-40.500.501100.2TJ -0.5-5
0.50
0.500
阻垢剂评价
100.0
（下转第128页）
的行为需要以长期教育为基础，存在诸多艰巨性和复杂性。大学生不吃早餐、早餐质量差是引起全天能量和营养素摄入不足的主要原因，面对能量摄入长期超标的学生体，可根据营养专家的相关建议，
在确保能量摄入总量不超标的情况下尽可能拆分更多餐次，同时加大其中水果、蛋奶制品等营养价值高的食品比例。这种改变策略可在早期降低学生畏难情绪，还可督促其平衡膳食、合理选择食物或食材[6]。该研究创新之处在于以性别为分组依据，比较男生和女生之间饮食习惯、营养状况、营养知识的构成差异，可为不同性别学生针对性开展科普或宣教提供依据、策略。但该研究亦有一定不足，中心研究纳入研究对象偏少，同时尚未从其他人口学资料的角度分析饮食习惯、营养状况、营养知识的具体特征。同时，研究所在学校同时设置有医学、非医学专业，该研究也尚未对两个专业学生进行组间比较，后续研究需在此基础上加以完善并予以全面概括。
参考文献
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[4]王静，王永红，李辉，等.河北某大专学生营养知识、态度及饮食行为调查[J].医学动物防制,2020,36(11): 1113-1115.
[5]袁雪晴.两省大学生健康素养现状及与健康行为、健康状况的关系研究[D].北京：中国疾病预防控制中心,2019.
[6]陈醇，张云钒，叶亦盛，等.某高校大学生夜宵现状调查[J].中国校医,2018,32(9):644-645.
为91.5%，相对标准偏差为4.14%；当添加浓度为0.10 mg·kg-1时，平均回收率为89.2%，相对标准偏差为1.66%；当添加浓度为0.50 mg·kg-1时，平均回收率为101.4%，相对标准偏差为1.24%，各浓度添加水平下的准确度精密度均符合GB/T 27417—2017中质量控制要求。
3 结论
采用QUECHERS方法对水稻中三氟苯嘧啶进行提取，使用高效液相谱-串联质谱对样品中三氟苯嘧啶进行检测。结果表明，该方法满足GB/T 27417—2017中对准确度和精密度的质量控制要求。该方法可用于水稻中三氟苯嘧啶残留量的检测，其方法定量限为0.03 mg·kg-1，在该定量限水平下，三氟苯嘧啶的平均回收率为90%～110%，相对标准偏差为5.78%。
安塞县高级中学
参考文献
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[6]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.实验室质量控制规范食品理化检测:GB/T 27404—2008[S].北京：中国标准出版社,2008.
[7]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.合格评定化学分析方法确认和验证指南:GB/T 27417—2017[S].北京：中国标准出版社,2017.
（上接第124页）
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