C－反应蛋白(C－reactive protein，CRP)是一种主要由肝脏合成的经典的急性时相反应蛋白，在调节先天免疫系统方面起着积极的作用。鉴于CRP检测的重要作用，其测量准确性和结果一致性受到了广泛的关注。实现检验结果一致性的重要途径是量值溯源和标准化，2011年，由国际临床化学学会(International Federation ofClinical Chemistry，IFCC)和参考物质与测量研究所(Institute for Reference Materials and Measurements，IRMM)研制出了ERM－DA474，这一物质当前被国内外厂商广泛用于量值溯源。展望五国
室间质量评价(external quality assessment, EQA)是多家实验室分析同一样本并回报检测结果，以评价实验室检测结果之间准确性和可比性的过程。卫生部临床检验中心2018年第1次EQA的统计数据表明当前国内检测CRP检测试剂种类众多，达到82种以上。但是不同检测试剂对同一浓度样本的检测数值差别较大,CRP检测的标准化问题亟需解决。 未来EQA发展的方向是采用具有互换性定值的物质，要求实验室重复检测样本，以获得实验室检测的精密度和正确度信息，同时获得厂商诊断试剂结果一致性和标准化状态的信息。本研究制备两个浓度CRP人血清基质正确度验证物质，前期的研究表明此物质与患者血清具有
良好的互换性。本研究利用ERM－DA474/IFCC国际标准物质通过量值传递的方式，在多家实验室多个检测系统为其定值，并将其试应用于北京市CRP室间质量评价/正确度验证计划。
材料与方法
一、材料
1．血清物质：
两个浓度正确度验证物质均来源于患者验后血清，前期研究证明其具有良好的均匀性和稳定性，并且与患者血清具有良好的互换性。国际标准物质ERM－DA474购自于IFCC，共10支(批号：003095)，有效期范围内。定值过程中稀释用低值血清来自健康体检个体混合血清(经西门子ADVIA 2400－ORION超敏CRP试剂和贝克曼5821配日本积水CRP试剂共同测定：每个系统分别测3次取均值，最终取两个系统的测定均值为CRP：0.27 mg/L)。
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2．定值检测系统：
(1)西门子2400全自动生化仪配德国西门子原厂试剂、校准品及质控品；(2)西门子2400全自动生化仪配德国德赛试剂、校准品及质控品；(3)西门子2400全自动生化仪配国产利德曼试剂、校准品及质控品；(4)西门子2400全自动生化仪配德国罗氏试剂、校准品及质控品；(5)贝克曼Immage800全自动免疫分析仪配原厂试剂、校准品及伯乐质控品；(6)贝克曼AU5821全自动生化仪配贝克曼原厂试剂、校准品及质控品；(7)贝克曼AU5821全自动生化仪配北京九强试剂、校准品及质控品；(8)贝克曼AU5821全自动生化仪配日本积水试剂、校准品及质控品；(9)贝克曼AU5821全自动生化仪配宁波美康试剂、校准品及质控品；(10)西门子BNⅡ全自动免疫分析仪配原厂试剂、校准品及质控品。(1)～(5)北京朝阳医院检验科的4个透射比浊法和1个散射比浊法，共5个检测系统：(6)～(10)北京潞河医院检验科的4个透射比浊法和1个散射比浊法，共5个检测系统。
3．正确度验证的实验室及检测系统：
北京地区采用常规CRP生化或免疫检测系统的42家医疗机构临床实验室。生化检测系统为开放式，包括：Beckman AU系列15家，HITACHI系列7家，Roche系列2家，西门子2400系列2家及其他品牌5家；免疫检测系统为封闭式，包括：Beckman Immage 800 7家，西门子BNP系列4家。
破茧狂龙二、多家实验室多系统联合定值
1．检测系统的选择：
根据卫生部临床检验2015年第1次EQA的851家实验室统计数据，从众多CRP检测仪器中选出目前使用率较高的4种主流仪器：Siemens BN II/BNProspec(22.8%)、Beckman IMMAGE/IMMAGE800(21.6%)、Beckman AU系列(9.7%)和Siemens ADVIA 1800/2400(1.7%)；在试剂选择上选出了全国使用率较高的8种CRP试主流试剂，包括：Beckman、Roche、Siemens、北京利德曼、日本积水、DiaSys、北京九强、宁波美康，使用率1.6%～23.0%；随后在两家三级医院将其组合为以上的10个检测系统：2个采用速率散射比浊法的封闭系统和8个采用增强透射比浊法的开放的检测系统。对10个系统分别做性能验证并在通过后的一周内完成定值。以这10个CRP血清学检测系统来作为CRP正确度验证物质的定值系统。
2．ERM－DA474工作曲线工作液的配制：
根据IFCC的ERM－DA474国际标准物质说明书。每瓶ERM－DA474血清CRP浓度为(41.2
±2.5)mg/L。取ERM－DA474冰冻人血清标准物质6支，严格按照说明书进行复溶。混匀后用加样取样，用CRP低值血清(0.27 mg/L)作为稀释液，用分析天平称量法测重量，精确配制工作曲线标准溶液；最终用称重法将ERM－DA474稀释成4个浓度水平，具体配制如表1所示，标记为W1－W4，－80 ℃冻存备用，实际浓度的计算公示如下：
表1 称重法稀释ERM－DA474国际标准物质
C1表示C反应蛋白国际标准物质中C反应蛋白的浓度；ρ1表示C反应蛋白国际标准物质的密
度；M1表示C反应蛋白国际标准物质的稀释溶液中C反应蛋白国际标准物质的质量；C2表示稀释液中C反应蛋白的浓度；ρ2表示稀释液的密度；M2表示C反应蛋白国际标准物质的稀释溶液中所述稀释液的质量；ρ3表示C反应蛋白国际标准物质和稀释溶液混合后的密度；C表示C反应蛋白国际标准物质和稀释溶液混合后的理论浓度蒋维平
彩电视机价格3．正确度验证物质定值工作液的配制：
水平2(L2)理论值(约25.3 mg/L)在工作曲线线性范围内，因此无需稀释。水平1(L1)理论值(约110.0mg/L)超出工作曲线线性范围，故将L1标物用低值血清稀释成两个浓度即U3和U4后，再进行定值，U3和U4与ERM－DA474的稀释液(W1～W4)的配制采用同一CRP低值血清(0.27 mg/L)，具体配制见表2,L2、U3和U4每种共配制12支，每支1 500 μl，放－80℃冻存备用。
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表2 称重法稀释正确度验证物质
4．所有定值样本的密度测定：
由于CRP的准确定值计算过程中需要各种工作液的密度，所以在配制完成后，分装冻存前用称重法准确测定每种工作液密度：公式：ρ＝m/v，采用有检定合格证书的加样吸取200 μl，经检定合格的分析天平称重计算，每份测定3次取均值(表3)。
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