DNA提取电泳pcr基因表达载体构建

DNA提取电泳pcr基因表达载体构建
基因表达载体之基本组成:
(1)结构基因即提取的目的基因核苷酸序列,负责
编码目标蛋白质。
(2)启动子——位于编码蛋白质结构基因之首一段殊结
运筹学单纯形法构的DNA片段,RNA聚合酶的识别部位和结合部位。
(3)终止子——位于编码蛋白质结构基因末端一段特殊
结构的DNA片段,具有终止基因转录过程的作用。
(4)复制原点——能够自我复制保证目的基因在受体细
胞中复制遗传和表达。
(5)遗传标记基因—检测受体细胞中是否含有目的基
因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
DNA提取电泳pcr实验:
一、
1、掌握DNA的提取技术
2、掌握PCR的相关操作
3、掌握了解电泳操作方法和步骤
二、实验原理:
半角字符
1、提取 DNA一般用水稻幼叶,先用机械方法液氨研磨植物组织使组织细胞破碎,然后加TPS抽提液水浴提取DNA,最后用无水乙醇沉淀DNA即可。(DNA提取原理)
2、DNA在高温时可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。( PCR原理)
3、琼脂糖凝胶电泳:借助琼脂糖凝胶的分子筛作用,核酸片段因其分子量或分子形状不同,
电泳移动速度有差异而分离。
三、实验仪器和药品
液氮、镊子、手套、移液、头惇2ML和 1.5ML离心管、水稻幼叶、研磨棒、琼脂糖、天平、PCR仪、Loading Buffer染剂、灭菌双蒸水、摇床、离心仪、Taq酶、Mg2+Buffer 、 dNTP溶液、引物、TPS 抽提液、无水乙醇、电泳槽、 GoldView 、TBE溶液、微波炉、锥形瓶、量筒、PCR板、PCR盖、水浴箱、Marker
四、实验步骤
1、DNA提取
(1)取水稻叶子少量置于―2ML离心管内,加入液氮研磨,带磨成粉状后,加﹑1MLTPS抽提液,然后将离心管放入75℃恒温水浴箱中至少半小时。同时将无水乙醇放入-40℃下冷冻(2)水域结束后,取出离心管放入离心仪中,13600r/min离心 12min,然后小心的取出离心管,将上清液转移到1.5ml离心管中 0.5ml,加入 600ul冷冻的无水乙醇,放入-80℃下冻10min,拿出放入离心仪13600r/min离心5min恋爱天使
(3)到处上清液,倒置,晾干约3h
(4)加入双灭菌水 60ml,放入摇床中振荡一夜。
2、PCR
(1)按所需配料表,向 PCR板中加入双蒸水 ,mix,前引物,后引物,然后加入提取的DNA,混匀
(2)将PCR板放入PCR仪中运行SSR程序
3、电泳
(1)称取0.3g琼脂糖和 30mlTBE溶液。混匀倒入锥形瓶中,加热溶解混匀。待冷却至不烫手时加入GoldView,混匀,倒入已经插好梳子的配胶槽中,冷却 30min至 1h核不扩散条约
(2)将冷却好的凝胶拔掉梳子后放入电泳槽中(将有点样孔的一端靠近负极)然后按照顺序点样,每个样的用来那个为4ul,在中间的空上点 Marker 溶液3ul
(3)打开电泳开关,电泳32min左右
高层低密度
楼钟(4)电泳结束后,将胶取出,放入透视镜下照射,拍照,读带

本文发布于:2024-09-22 01:06:11,感谢您对本站的认可!

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