一、目的
1.熟悉还原糖测定的基本原理;
2.熟练掌握用3,5二硝基水杨酸法测定还原糖的方法;
3.测定并比较常见水果中的还原糖含量,对平时食用提供参考。
二、原理
1.搜集相关资料知,常见水果(如:葡萄、柑橘、苹果、梨)中均含有较为丰富的还原糖,即单糖(如葡萄糖、果糖)和某些寡糖(如麦芽糖等),它们含有游离的醛基或酮基,具有还原性。
2.3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的原理:还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产
物,3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,还原糖的量与棕红物质颜的深浅成正比关系,利用分光光度计,在540nm波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖含量。 三、实验器材
材料:新鲜水果:黑加仑,砂糖桔,秦冠苹果,皇冠梨; 仪器:电子分析天平、水浴锅、紫外可见分光光度计、移液、量筒、100mL容量瓶、吸管、玻璃漏斗、试管若干、研钵、三角烧瓶;
试剂:
1.标准葡萄糖溶液(1.0mg/ml):准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg,溶于蒸馏水并定容至100ml,混匀,备用;
2.DNS试剂:将0.63gDNS和26.2ml2mol/L NaOH溶液,加到50ml含有18.5g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加0.5g结晶酚和0.5g亚硫酸钠,搅拌溶解,冷却后加蒸馏水定容至100ml,存于棕瓶中备用。
四、实验操作及数据记录
材料处理
1.取实验材料黑加仑,砂糖桔,秦冠苹果,皇冠梨,经(剥)削皮处理后,各取50g左右,放入研钵中研磨,至匀浆状;
2.分别准确称取2g果浆放于三角烧瓶中,并用编号标记,再加入约30ml蒸馏水,用封口膜封口,放入沸水浴中提取30min;
3.待冷却后,用分液漏斗过滤,并用蒸馏水冲洗玻璃棒及三角烧瓶,一同转移至100ml容量瓶中并进行标记(黑加仑→A;砂糖桔→B;秦冠苹果→C;皇冠梨→D),用蒸馏水定容,摇匀,即得到四种待测样品液;
制作标准曲线
◆取6支干净的试管,分别编号为0、1、2、3、4、5并按下表剂量依次加入相关试剂,进行标准曲线的制作;
表一 3,5二硝基水杨酸法定糖——标准曲线的制作
管号 试剂 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
标准葡萄糖溶液(ml) | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
蒸馏水(ml) | 1.0 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
DNS(ml) | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| 置于沸水浴中煮沸5min,取出,用自来水冷却 |
蒸馏水(ml) | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 |
葡萄糖含量(mg) | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
540nm处吸光度 | 0 | 0.042 tmds | 0.141 | 0.246 | 忆韦素园君 0.343 | 0.469 |
| | | | | | |
◆以标准葡萄糖含量(mg)作横坐标, 540nm处吸光值作纵坐标,作出标准曲线
测定样品液中还原糖的测定
◆取12支干净的试管,分别编号为A1、A2、A3,B1、B2、B3,C1、C2、C3,D1、D2、D3,并按表二剂量依次加入相关试剂,测定样品液的吸光值,操作方法与标准液类似,每种材料做三组。
表二 3,5二硝基水杨酸法定糖——样品液的测定
管号 试剂 | A1 | A2 | A3 | B1 | B2 | B3 | C1 | C2 | C3 | D1 | D2 | D3 |
待测液(ml) | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.2 | 0.4 | 0.6 |
蒸馏水(ml) | 南昌七城会0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.8 | 0.6 | 0.4 |
DNS(ml) | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| 置于沸水浴中煮沸5min,取出,用自来水冷却 |
蒸馏水(ml) | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0 | 9.0北京雪亮眼镜店 | 9.0 | 9.0 |
还原糖含量(mg) | a1 | a2 | a3 | b1 | b2 | b3 | c1 | c2 | c3 | 粤海风d1 | d2 | d3 |
540nm处吸光度 | 0.145 | 0.315 | 0.552 | 0.038 | 0.129 | 0.218 | 0.145 | 0.302 | 0.474 | 0.082 | 0.201 | 0.327 |
| | | | | | | | | | | | | |
五、计算
◆根据测得的吸光光度值,剔除不在分光光度计最适测量范围内的数值,再将剩余的吸光度值(Y)代入标准曲线方程(y = 0.479x - 0.0327),得到测定时样品中还原糖的量(X) a,b,c,d ;(单位:mg)
◆按照下列公式分别计算(黑加仑→A;砂糖桔→B;秦冠苹果→C;皇冠梨→D)中还原糖的百分含量;
W1、2、3(还原糖)=×100%
取平均值: W(还原糖)=()
◆计算结果如下:
不同水果中还原糖百分含量的计算
水果 | 黑加仑 | 砂糖桔 | 秦冠苹果 | 皇冠梨 |
管号 | a1 | a2 | a3 | b1 | b2 | b3 | c1 | c2 | c3 | d1 | d2 | d3 |
吸光度 | 0.145 | 0.315 | 0.552 | 0.038 | 0.129 | 0.218 | 0.145 | 0.302 | 0.474 | 0.082 | 0.201 | 0.327 |
还原糖含量(mg) | 0.371 | 0.726 | 1.221 | ----- | 0.338 | 0.523 | 0.371 | 0.699 | 1.058 | ----- | 0.488 | 0.751 |
还原糖百分含量w | 9.3% | 9.1% | 10.2% | ----- | 4.2% | 4.4% | 9.3% | 8.7% | 8.8% | ----- | 6.1% | 6.3% |
w(平均) | 9.5% | 4.3% | 8.9% | 6.2% |
| | | | | | | 塞风 | | | | | |
六、结果分析及讨论
⏹四种水果(黑加仑,砂糖桔,秦冠苹果,皇冠梨)中还原糖百分含量的比较
根据测量结果可知,在这四种常见水果中,黑加仑中还原糖的百分含量最高为9.5%,其次是秦冠苹果为8.9%,再然后是皇冠梨为6.2%,还原糖含量最低的是砂糖橘为4.3%,查资料可知,黑加仑的还原糖含量一般来说在12%左右,本实验结果与之相差较大,经分析可能是因为季节的原因,本实验的时间是在冬天,而黑加仑适宜生长的季节在夏天。根据
口感来说,砂糖橘最甜,但砂糖橘的还原糖含量仅为4.3%是这四种水果当中最低的,所以根据甜度来判断还原糖的含量是不科学的。
六、实验意义
1.学会自我设计实验,进行探索,使我们能有一套完整的从实验设计、安排到自主实践、结果分析的研究思想;
2、根据实验测得的不同水果中还原糖含量,对我们日常食用水果的量与比例提供一定的参考