设计性实验——不同水果中还原糖的含量比较

不同水果中还原糖的含量比较

——3,5-二硝基水杨酸法

实验参与人员：胡诗颖、李真、邱成祺、刘劲涛、项彦喆

一、实验目的

1、比较个水果中还原糖的含量

2、熟练掌握用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。

二、香港历史资料实验原理

1. 还原糖是指含有自由醛基或者酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖；利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来；对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

2. 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红的3-氨基-5-硝基水杨酸。

3. 在过量的NaOH碱性溶液中， 3-氨基-5-硝基水杨酸呈橘红，在540nm处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值成线性关系。利用比法，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

三、实验器材

仪器：天平，离心机，水浴锅，分光光度计，试管，容量瓶，三角烧瓶，移液管，洗耳球，玻璃棒，离心管，比皿

材料：苹果，橘子，香蕉

试剂：蒸馏水，标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml），DNS试剂

五、操作步骤

1、样品中还原糖的提取

准确量取5ml水果汁置于50ml三角烧瓶中，加20ml蒸馏水，搅拌，50℃水浴，30min (不时搅拌)，转移至50ml离心管中，4000rpm，5min，将上清液置于容量瓶中，向沉淀中加20ml蒸馏水，洗涤沉淀，转移至50ml离心管中4000rpm，5min，将上清液置于容量瓶，沉淀弃入垃圾桶。向容量瓶加蒸馏水定容至50ml,混匀，取2个0.5ml进行还原糖的测定。

2、制作葡萄糖标准曲线

取8支洁净的试管，分别用记号笔标上0～7号，按照下表进行操作。其中0～5管，用于标准曲线的制作,以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线。

西门子m55

管号试剂	0	1	2 会员信息系统	3	4	5	6	7
标准葡萄糖溶液/ml	0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0	0.5	0.5
拉帮套蒸馏水/ml	1.0	0.8	0.6	0.4	0.2	0	0.5	0.5
DNS试剂/ml	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
	食用菌多糖沸水浴中准确煮沸5min，取出，
蒸馏水/ml	9.0	9.0	9.0	9.0	9.0	9.0	9.0	9.0
葡萄糖含量/mg	0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0	C1	C2
A540nm							a	b