磷酸缓冲液的(PH6.8)配制
A:磷酸二氢钾:4.559g +500ml蒸馏水
B:磷酸氢二钠:11.908g +500 ml蒸馏水
C:Giemsa原液
A+B+C=22ml+27ml+7.5ml
磷酸缓冲液的(PH7.2)配制
A:磷酸二氢钾:1.77g +1000ml蒸馏水
B:磷酸氢二钠:19.4g +1000 ml蒸馏水
C带制作法
1. 用0.0175M的NaOH溶液处理半分钟后再处理1分钟,取出放在75﹪、75﹪、95﹪、95﹪的各级酒精中漂洗1-2分钟(脱水),将玻片干燥后置于已经预热650C的6SSC溶液中,放在 军事史林水浴箱中12-17小时,再用370C预热的蒸馏水漂洗干净,染。 试剂的配制方法
1. NaOH 0.7g+蒸馏水1000ml
2. 12SSC溶液
硝酸铜
微核率操作步骤
培养72小时标本----收集离心1500/分钟(10分钟)----去上清----加预热的0.1MKCL(37度)----混匀,培养箱5分钟----预固定(1ML) 室温5分钟----离心----去上清,固定(5ML)20分钟----离心,去上清,加适量的固定液、混均----制片。微核试验
3ml的蒸馏水+3ml的Giemsa.
McI1vaine’s储藏液、染液、冲洗液的配置
一. 目的:
McI1vaine’s储藏液是为玻片染准备。
McI1vaine’s冲洗液是为产前染体检查准备。
二.料和试剂
1 磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O),分子量是328
2 柠檬酸(C6H8O7),分子量是210.14
3 去离子超纯水
4 甲醇(CH人与野兽3OH)
三.操作步骤
McI1vaine’s储藏液:
1.A液:0.2M的磷酸氢二钠溶液(71.6g+1000ml水)
B液:0.1M的柠檬酸溶液(21.014g+1000ml水)
2.375ml的A液+125ml的B液
3.用1N的盐酸或1M的氢养化钠调节PH到6.8
McI1vaine’s染缓冲液
1. 2730ml水+180ml McI1vaine’s储藏液+30ml甲醇
2. 黛安莲恩用1N的盐酸或1M的氢养化钠调节PH到6.8
3. 贴上有完整信息的标签(储存要求4度,六个月)
McI1vaine’s冲洗缓冲液
1. 2820ml水+180mlMcI1vaine’s储藏液
2. 1N的盐酸或1M的氢养化钠调节PH到6.8
3. 贴上有完整信息的标签(储存要求4度,六个月)
染液配制:24ml麦氏染缓冲液+16ml水+14ml磊氏染储存液(1.6mg/mL)
磊氏染储存液:聚类分析论文0.8g(磊氏染液Sigma)+500ml(甲醇),磁力搅拌器搅拌2小时,置于37度的恒温箱72小时。