常用抗凝剂配制和使用归纳

常用抗凝剂的配制及用法
在医学实验中常需动物的全身抗凝,采出的全血或血浆有的也需参加适当的抗凝剂抗凝.对抗凝剂的要求是:用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质.
一、肝素
〔1〕肝素抗凝作用原理 七彩金曲排行榜
肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂,肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力,阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用,从而使血液不发生凝固.
考前须知:做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素!因为肝素是聚合酶链式反响的抑制剂!
〔2〕配制和用量
纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U,10~20U能抗1 ml血液计).但由于肝
名门秀女素制剂的纯度上下以及其保存时间长短不等,因而其抗凝效果也不一样.一般可配成1%肝素生理盐溶液,用时取0.1毫升于试管内,100℃烘干,每管能抗凝5~10ml血液.也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁,直接抽血至注射器内而使血液不凝.在动物实验作全身抗凝时,一般剂量为:大白鼠2.5~3.0mg/200~300g体质量,兔10mg/kg体质量,狗5~10mg/kg体质量.肝素可改变蛋白质等电点,因此当用盐析法别离蛋白质作蛋白质各局部的测定时,不可采用肝素.市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U,相当于100mg.
二、草酸盐合剂   
〔1〕原理
草酸胺能使血细胞略为膨大,而草酸钾能使血细胞微缩小,因此草酸铵与草酸钾按3:2比例配置,可使血细胞体积保持不变;加福尔马林那么能防止微生物在血中繁殖.此抗凝剂最适于作红细胞比积测定.
〔2〕配制方法及用量
草酸铵1.2g、草酸钾0.8g、福尔马林1.0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂
0.1ml(即相当草酸铵1.2mg,草酸钾0.8mg).根据取血量将计算好的草酸盐剂量参加玻璃容器内烤干备用.如取0.5ml于试管,烘干后每管可使5ml血不凝固.
〔3〕考前须知
草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子,而到达抗凝目的.用时注意加的量应适中,不能过多,以免阻碍去蛋白质血滤液的制取.不适用于血液内钙或钾的测定,也不能用于血液非蛋白氮测定.
三、枸櫞酸钠
常配成3~5%水溶液.也可直接加粉剂,每毫升血加3~5mg,即可到达抗凝目的.
枸櫞酸钠可使钙失去活性,防止凝血.但其抗凝作用较差,碱性较强,不宜作化学检验之用.仅可用于红细胞沉降速度测定.急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为5~6%溶液.
四、草酸钾
〔一〕原理和考前须知
草酸钾为最常用的抗凝剂.其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合,形成不溶解的草酸钙,使血液不凝固.常用于非蛋白氮测定,但不适用于测定钾和钙.草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性,故应注意.
〔二〕配制及使用方法吴君玉
取草酸钾10g,加蒸馏水少许使溶解,再加蒸馏水至100ml.配制成10%水溶液,如每管加0.1ml那么可使5~10ml血不凝.一般如作微量检验,用血量较少,可配制成2%溶液,如每管加0.1ml可使1~2ml血液不凝.
五、乙二胺四乙酸二钠盐〔EDTA〕
EDTA对血液中钙离子有很大的亲和力,能与钙离子络合而使血液抗凝.每0.8mg可抗凝1ml血液.除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外,适用于多种抗凝.
六、〔酸性〕柠檬酸葡萄糖溶液B〔ACD〕〔用于新鲜抽提或者是冻存的血样品,实验室常用
柠檬酸钠:1.32%〔M/V〕
柠檬酸:0.48%〔M/V〕
葡萄糖:1.47%〔M/V〕
ACD抗凝剂为:柠檬酸0.48g、柠檬酸钠1.32g、葡萄糖1.47g,加水至100ml,灭菌后备用
一般20ML新鲜血液中参加3.5ML ACD抗凝剂.比例依次类推!!酚醛树脂
血液可以在0度条件下保存数天,或者是零下70度条件下无限期保存!
考前须知:做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素!因为肝素是聚合酶链式反响的抑制剂!
从全血中制备基因组DNA,ACD做为抗凝剂要优于EDTA,因为他更加能保存高分子质量的DNA,然而,血样常常被收集于用定量EDTA作为抗凝剂的小管中.
在大多数美国的医院中,收集血样的小管均用颜标明是否含有抗凝剂,紫顶管盖的小管一般含有抗凝剂,通常是EDTA的干粉.黄顶盖的小管不含抗凝剂.
在分子克隆实验中,前者一般用于收集血样用于制备基因组的DNA,后者用于收集血样作为用EB病毒的永生化淋巴细胞的来源.这些永生化的细胞可以作为可更新的来源来制备大量的DNA以备后用,如进展遗传学的研究等等!
阿氏液配方:   
葡萄糖 2.05克   柠檬酸钠 0.8克   柠檬酸 0.055克   氯化钠 0.42克   
加蒸馏水至100毫升,调PH值至6.1,115度,10分钟灭菌.4度保存.承德师专
PBS 1L配方pH7.4:
磷酸二氢钾(KH2PO4):0.28g,   磷酸氢二钠(Na2HPO4):1.15g,   
氯化钠(NaCl):8g,            加去离子水定容到1L.

本文发布于:2024-09-20 20:48:10,感谢您对本站的认可!

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