merfish技术是一种高通量多发性荧光原位杂交(Multiplexed Error-Robust Fluorescence In Situ Hybridization)技术,经过近年的发展已成为生命科学领域中最具有前景的单细胞测序技术之一。该技术独特的原理和方法,可实现对单细胞进行多重靶向探测,从而深入研究细胞的生物学特性,对于疾病诊治及药物研发等方面也有着广泛的应用价值。 merfish技术原理
智力七巧板 merfish技术的核心原理是,将mRNA和其他RNA分子定位于细胞中以检测其表达水平,靶向探测的过程分为两个阶段:原位荧光杂交和成像分析。主要步骤如下: 1.设计代表每个靶向RNA的寡核苷酸探针。
2.利用辅助Oligo表达的固定序列,在RNA序列上的每个位置引入一个位点,在每个位点上放置一个8bp的barcode序列,以标识每个探针对应的RNA,同时避免检测互补序列的影响。
3.合成数百种不同的寡核苷酸探针,每种探针都包含一个不同的barcode序列和多个特异性组分。
干支表 4.将这些探针与特异的RNA相结合,继而进行原位荧光杂交,并形成mRNA-barcode的复合物。
5.可以标记这些复合物,以便在使用荧光显微镜检测时识别它们,该技术还可以识别未知的RNA序列。
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6.最后,通过成像分析来检测荧光标记,以确定不同组分的mRNA在细胞中的分布情况。
merfish技术的优点
merfish技术相比于传统的原位荧光杂交技术有着很大的优势:
1.多重检测。merfish技术可以检测大量的靶向RNA,这使得研究者可以同时测量大量不同的转录本,从而深入研究细胞的生物学特性。
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2.高通量。通过使用数百种不同的探针,merfish技术可以在单一实验中定位和测量大约200多种转录本,其高通量的检测效率有着广泛的应用价值。
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3.高灵敏度。merfish技术可以检测低表达的转录本,从而获得更加精确的研究结果。
4.高分辨率。merfish技术可以高分辨率地检测细胞内的转录本,这一点对于细胞内RNA的空间分布研究有着极强的优势。王宏峥
总结
merfish技术作为一种高通量多发性荧光原位杂交技术,其优点突出,应用价值广泛。该技术采用特异的探针,可以同时检测大量的靶向RNA,高效地解决了传统原位荧光杂交技术的限制,相信在后续的单细胞测序领域得到更广泛的应用。