...EPO—α—MHC启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及缺氧调控功能考察...

u50pGL3—EPO—α—MHC启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及缺氧调控功能考察结冷胶

拉索

目的考察EPO-α-MHC启动子在缺氧条件下的调控表达作用。方法构建pGL3-EPO-α-MHC启动子编码荧光素酶报告基因的质粒，以含pGL3-EPO-α-MHC和pGL3-CMV启动子的质粒分别转染缺氧和常氧的心肌细胞（H9C2），检测荧光素酶的表达。结果 pGL3-CMV启动子质粒在缺氧条件下的报告基因表达与常氧条件相比显著下降（P < 0.05），而pGL3-EPO-α-MHC启动子在缺氧条件下能够显著上調报告基因的表达4.3倍（P < 0.01）。结论 EPO-α-MHC启动子具有缺氧调控功能。

功率谱标签： pGL3-EPO-α-MHC启动子；荧光素酶报告基因；质粒构建；缺氧调控

α-MHC promote是研究报道中常用的一种心肌特异性启动子，用于调控基因在心肌组织的特异性表达[1]。为了增加基因在心肌缺血缺氧区域的表达，本研究选用促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）作为心肌特异性启动子的缺氧反应调控元件。构建pGL3-EPO-α-MHC启动子编码荧光素酶报告基因的质粒（pGL3-EPO-α-MHC-LUC），考察该质粒在缺氧条件下的表达，评价EPO-α-MHC启动子的缺氧调控功能。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

荧光化学发光酶标仪（美国Thermo公司）；紫外分光光度计（美国 Thermo公司）。荧光素酶检测试剂盒、BCA检测试剂盒、LDH检测试剂盒（美国Promega公司）；Lipofectamine 2000（美国Invitrogen 公司）；DMEM培养液（美国GIBCO公司）；H9C2细胞（中科院上海细胞库）；pGL3- CMV-LUC质粒（美国Promega公司）；质粒抽提试剂盒（美国Axygen公司）；其他试剂均为国产分析纯。

一切的一切1.2 pGL3-EPO-α-MHC-LUC质粒构建

可编程控制

本文发布于:2024-09-20 22:22:48，感谢您对本站的认可！

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