载体构建(vectorconstruction)，为把DNA分⼦运送到受体细胞中去，必须寻⼀种能进⼊细胞、在装载了外来的DNA⽚段后仍能照样复制的运载体。理想的运载体是质粒(plasmid)，在基因⼯程中，常⽤⼈⼯构建的质粒作为载体。载体构建即是构建含外源DNA的质粒。北京openlab
载体构建是分⼦⽣物学研究常⽤的⼿段之⼀。主要包括已有载体多克隆位点MCS的改造和已有载体启动⼦、增强⼦、筛选标记等功能元件的改造。载体构建完成后可利⽤PCR原理进⾏测序验证。 日落公园⼈⼯构建质粒
⼈⼯构建的质粒可以集多种有⽤的特征于⼀体，如含多种单⼀酶切位点、抗⽣素耐药性等。常⽤的⼈⼯质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr)，并含有5种内切酶的单⼀切点。如果将DNA⽚段插⼊EcoRI切点，不会影响两个抗⽣素基因的表达。但是如果将DNA⽚段插⼊到Hind Ⅲ、BamH Ⅰ或 SalⅠ切点，就会使抗四环素基因失活。这时，含有DNA插⼊⽚段的pBR322将使宿主细菌抗氨苄青霉素，但对四环素敏感。没有DNA插⼊⽚段的pBR322会使宿主细菌既抗氨苄青霉素⼜抗四环素，⽽没有pBR322质粒的细菌将对氨苄青霉素和四环素都敏感。pSC101与pBR322相似，只是没有抗氨苄青霉素基因和PstI 切点。质粒运载体的最⼤插⼊⽚段约为10 kb(kb表⽰为千碱基对)。
选择质粒载体的要素是要了解可⽤到的载体的特征和预测重组克隆所⽤于的实验。
所有的质粒载体都有三个共同的特征：⼀个复制⼦、⼀个选择性标志和⼀个克隆位点。复制⼦是含有DNA复制起始位点的⼀段DNA（ori），也包括表达由质粒编码的复制必需的RNA和蛋⽩质的基因。选择性标志对于质粒在细胞内持续存在时必不可少的。克隆位点是限制性内切酶切割位点，外源性DNA可由此插⼊质粒内，⽽且并不影响质粒的复制能⼒，或为宿主提供选择性表型。土壤重金属标准
选择性标志：编码抗⽣素抗性的基因对质粒载体来说是最普遍的细菌选择性标志（如
pBR322）；主要的抗⽣素选择基因有：氨苄青霉素，氯霉素，四环素和卡那霉素四种。转化的宿主菌⼀般都是抗⽣素敏感型的，获得质粒后，它能在有抗⽣素的平板上⽣长，从⽽达到筛选的要求。另⼀个显性的选择标志就是对λ噬菌体感染的免疫（也就是λ阻抑物）。有时也会⽤的⼀些隐性标志，如leuB-（亮氨酸存在时就不能⽣长）。
如今的载体都含有⼀多克隆位点（Multiple cloning site, MCS）或多位点接头[包含约20个串联排列的限制性内切核酸酶位点（如pUC19）]这些位点在载体内通常是独⼀⽆⼆的，这样就可以防⽌插⼊⽚段插⼊不恰当的位置，如载体其他的特征导致破裂的位点。多克隆位点的存在可以确保载体合适⼤部分的DNA⽚段，可以针对插⼊⽚段提供特定的酶切位点图谱，在质粒重组操作⽅⾯具有更⼤的灵活性。在选择质粒载体时既要考虑在多接头处出现的是何位点，⼜要考虑到这个位点的顺序，因为必须确保
特定的位点存在于多接头⾥。
载体构建流程：
>c型卡环
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