液相谱

水质对HPLC的影响
高效液相谱法跨越百年的美丽主要内容High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)是一种有效可靠的技术,目前已成为许多实验室研究的重要工具。HPLC最常见的一个问题就是溶剂中的污染物对分析结果的影响。
1坑槽修补、颗粒
颗粒可以损坏泵和注射器。颗粒也可以堵塞谱柱并且熔化它,这会导致回压增大。颗粒还会表现为另一种固相,可能改变样品的组分。
2、有机物
超纯水中的有机物可能影响谱峰的分离度和积分、可能导致鬼峰、还可能改变固定相的选测性以及影响谱基线。
3、离子
离子浓度的改变会影响分离结果,部分能吸收UV的离子会对峰产生影响。某些有腐蚀性离
子的还会降低高压输液泵等配件的使用寿命。
4、胶体
电脑爱好者2012胶体会不可逆的吸附在固定相上面,影响柱的分离效果。
5、微生物
微生物会堵塞谱柱,其代谢产物会增加有机物,颗粒等污染物。
 瓶装纯净水蒸馏水是目前部分HPLC分析中使用的纯净水,由于瓶装纯净水和蒸馏水均只是普通纯水而不是超纯水,水中仍含有少量离子和有机物等杂质,用以配制液相和洗脱液不仅可能污堵昂贵的谱柱,也影响HPLC定出平坦的基线。
瓶装纯净水的纯化工艺,通常包括吸附、过滤、反渗透等,对颗粒性有机物的去除效果较好,但对微量离子及有机物的去除却不能满足高灵敏度的HPLC实验之需求,并且,由于其包装通常多为PVC瓶,透氧率高,同时存在一定的化学溶出量,从而污染瓶中的纯净水,尤其是保存一段时间后,水质下降更多,因此表现在HPLC谱图上,虽无特定吸收峰,但基线存在较严重的不稳干扰。
蒸馏水是指用蒸馏方法制备的纯水。可分一次和多次蒸馏水。水经过一次蒸馏,不挥发的组分残留在容器中被除去,挥发的组分进入蒸馏水的初始馏分中,通常只收集馏分的中间部分,约占60%,要得到更纯的水,可在一次蒸馏水中加入碱性高锰酸钾溶液,除去有机物和二氧化碳;加入非挥发性的酸(硫酸或磷酸),使氨成为不挥发的铵盐。通过对双蒸水进行HPLC检测时发现,254nm214nm22-27分钟时都出现较强的吸收峰,这表明有疏水性较强的有机物污染,其原因应是蒸馏过程的共沸现象导致了某些挥发性有机物去除不彻底。
 超纯水系统综合了反渗透、离子交换、活性炭吸附、膜过滤、超滤及紫外光氧化等多种纯化工艺,产水电导率达到18.2MΩ•cm, 产水水质超过国标一级水标准且稳定可测,超纯水即取即用,不会因储存引入污染,水质有保证,较之使用瓶装纯净水或蒸馏水,更能满足用户高精度仪器分析的需要。
 保留时间漂移的故障排除
保留时间不重现有两种不同的情况:即保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化,而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对
到问题的原因往往很有帮助。如,保留时间的漂移往往由柱老化引起;而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上,保留时间漂移的多半原因是不同机理的谱柱老化,如固定相流失(例如通过水解),谱柱污染(由样品或流动相所致)等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下:
遗传漂变一、谱柱平衡
如果我们观察到保留时间漂移,首先应考虑谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要1020个柱体积的流动相,但如果在流动相中加入少量添加剂(如离子对试剂)则需要相当长的时间来平衡谱柱。
流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到谱柱上,从而造成保留时间的漂移。应注意:水是很容易污染的流动相成分。
二、固定相稳定性
固定相的稳定性都是有限的,即使在推荐的PH范围内使用,固定相也会慢慢水解。例如,硅胶基质在pH4时水解稳定性最好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和
三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定;长链键合相比短链键合相稳定;烷基键合相比氰基键合相稳定的多。
经常清洗谱柱亦会加速谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解,如氨基键合相等。pc-based>潘广田
三、谱柱污染
保留时间漂移的另一个常见原因是谱柱污染。HPLC谱柱是非常有效的吸附性过滤器,它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是:流动相本身,流动相容器,连接管、泵、进样器和仪器密封垫,以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。
样品中如果存在谱柱上保留很强的组分,就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。如:配药中的赋形剂,生化样品(如血清)中的蛋白及类脂类化合物,食品样品中的淀粉,环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量,在此情况下,保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取(SPE)等样品前处理方法来去除样品基质的影响。

本文发布于:2024-09-22 09:52:45,感谢您对本站的认可!

本文链接:https://www.17tex.com/xueshu/616045.html

版权声明:本站内容均来自互联网,仅供演示用,请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系,我们将在24小时内删除。

标签:保留   色谱   时间   样品   流动
留言与评论(共有 0 条评论)
   
验证码:
Copyright ©2019-2024 Comsenz Inc.Powered by © 易纺专利技术学习网 豫ICP备2022007602号 豫公网安备41160202000603 站长QQ:729038198 关于我们 投诉建议