高效液相谱仪校验规程完整

标准文件

Standard document

文件编号 Document No.	SOP-LOP-790-8/00	高效液相谱仪校验规程gopubmed Calibration SOP for HPLC		页微分算子码 Page	1 / 9
状态 Status	正式 Formal	高效液相谱仪校验规程gopubmed Calibration SOP for HPLC		备份号 Control No.
起草人 Written by		起草日期 Written date	年月日	颁发部门 Issued department	质量管理部 Quality department
审核人 Reviewed by		审核日期 Reviewed date	年月日	颁发部门 Issued department	质量管理部 Quality department
批准人 Approved by		批准日期 A呼和浩特教育公共服务平台pproved date	年月日	生效日期 Effective date	年月日
分发部门Distributed department：质量负责人质量管理部 QA QC

1、目的Objective：建立高效液相谱仪内部校验规程，确保校验工作规范、顺利进行。

2、范围Scope ：本规程适用于本公司使用的高效液相谱仪（紫外-可见光检测器/二极管阵列检测器）的校验。

3、职责Responsibilities：

3.1 蛋白质序列培训职责：本文件起草人或审核人或批准人负责对质量管理部全体人员培训。

3.2 QC：负责制定本规程，并对本规程的实施负责。

3.3 QA：负责监督和检查本规程的实施。

4、定义Definition：无。

5、程序Procedures：

5.1 依据

国家计量校验规程JJG 705-2002液相谱仪，安捷伦液相说明书，岛津液相说明书。

5.2 备件及材料

5.2.1水：HPLC级水。

5.2.2化学试剂：乙腈（HPLC）、丙酮（分析纯）。

5.2.3标准品。

5.2.4标样。

0.005 mg/ml, 0.010 mg/ml, 0.025 mg/ml,0.050 mg/ml,0.125 mg/ml和0.250 mg/ml水溶液。

5.2.5谱柱： 4.6mm×250mm，C18，5µm。

5.2.6 容量瓶：10ml。

5.2.7玻璃注射器。

5.2.8 限流阻尼管。

5.2.9 分析天平。

5.2.10 秒表。

5.2.11 热电偶

5.3 校验项目及技术指标

5.3.1泵性能的测试

表1

校验项目	指标
流量设定值(ml/min)	0.5	1.0	1.5	2.0	2.5
流量设定值误差，\|SS \|＜	5%	2%	2%	2%	2%
流量稳定性误差，SR ＜	3%	2%	2%	2%	2%

5.3.2柱温箱温度稳定性测试*

表2

校验项目	指标
温度设定值 (℃)	20	25	30	35	40
温度设定值误差	\|△T\|＜2℃
控温稳定性误差	TC ≤1℃

备注：如药典专论规定的特定柱温，不在以上温度范围之内，则对分析该品种的仪器增加该温度点校验，校验项目和可接受指标相同。

5.3.3 检测器性能测试

表3

校验项目	指标
基线噪声：	≤5×10-4AU
基线漂移：	≤5×10-3AU/h
波长准确度：	\|△λ\|≤2nm
线性测试：相关系数R 响应因子f的RSD	≥0.999
线性测试：相关系数R 响应因子f的RSD	≤5.0%

5.3.4进样器性能测试

表4

校验项目		指标
进样器精密度测试：	定性重复性(Rt)RSD定性	≤ 1.0%
进样器精密度测试：	定量重复性(峰面积) RSD定量	≤ 2.0%
自动进样器线性测试*：相关系数R 响应因子f的RSD		≥0.999
自动进样器线性测试*：相关系数R 响应因子f的RSD		≤5.0%

5.3.5梯度组成的测试*

表5

校验项目	指标
梯度准确度	\|TSH-MSH\|≤2%
梯度准确度的精密度	金长城国际广告≤0.5%

注：*表示该项目的内部校验取决于仪器的配置，有该配置则为必检项目。

5.4 校验方法

5.4.1校验通则

5.4.1.1 HPLC的内部校验由仪器所属部门经培训的使用者按本规程进行校验，其校验项目依仪器配置和使用范围而定。

5.4.1.2 政府部门每一年对HPLC进行校验，每六个月内部对HPLC进行一次校验；仪器配置的关键部件大修或更换后，可参考本规程对该部件相关的项目进行校验，以对仪器的性能进行确认。

5.4.1.3 校验时，同时检查、确认仪器的安装，使用环境符合要求，仪器处于正常的状态下，并检查、确认仪器的接线牢固，接地良好。

5.4.1.4 不同配置的仪器，须按照规定的校验项目及指标进行内部校验，以保证该仪器的所有使用功能均进行了校验。

5.4.2 泵性能的测试－SS和SR的测定

5.4.2.1 测试条件：

流动相：水；

谱柱：限流阻尼管。

5.4.2.2 测试：

分别设定流速为0.5ml/min， 1.0ml/min，1.5ml/min，2.0ml/min，2.5ml/min等值进行校验，这些流速覆盖了实验室使用的流速范围。待流速稳定后，在流动相流出口处用容量瓶准确地收集流动相10.0ml，同时用秒表计时，各测量3次，按公式(1)、(2)计算SS和SR，并以下表所列内容记录测试数据和结果。

表6 泵性能的测试

泵流量设定值：流动相体积：

什么是美貌效应次数项目	1	2	3
收集时间t(秒)
流量实测值Fm(ml/min)
泵流量设定值误差SS
泵流量稳定性误差SR

5.4.3柱温箱温度稳定性测试—△T 和Tc的校验

5.4.3.1测试

将测温仪之热电偶固定在柱温箱中央，关好柱箱门。以限流阻尼管替代谱柱，分别设定柱温箱温度为20℃，25℃，30℃，35℃，40℃等值进行校验，这些温度覆盖了实验室使用的柱温范围。待测温仪指示温度稳定后，记录温度显示值，每隔5分钟测一次，每个温控点测定1小时，求出平均值，并以下表所列内容记录测试数据和结果。设定值与平均值之差为设定值误差△T，13次测量值中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc。

表7 柱温箱温度稳定性测试

温度设定值：