取叶片400 mg(去叶脉)置于研钵中，加入0.1 g PVP于液氮中碾成粉末．领导者的作用
转入2.0 ml 离心管中并加入1.5 ml 于-20℃预冷的提取液(含10% TCA 和0.07% DTT 的丙酮溶液)，-20℃沉淀过夜．于4℃，20 000 g 离心1 h，弃上清．沉淀悬浮于1.5 ml -20℃预冷的丙酮溶液(含10% TCA 和0.07%DTT)中，-20℃沉淀过夜．同上离心，重复洗涤沉淀3～4 次至蛋白质为乳白．最后将沉淀真空冷冻干燥成干粉，于-80℃冰箱保存备用． 2甘蓝型油菜根系可溶性蛋白的提取及双向电泳体系的优化通古斯族
称取0. 5 g 根样于液氮预冷的研钵中, 加液氮研磨至粉状，将粉末移至10 mL 离心管中, 加入10 倍体积的提取液( 10% T CA/ 丙酮，1 mmol/ L 苯( PMSF) , 0. 07% 2-巯基乙醇) , 涡旋震荡1 min, - 20℃静置2 h 或过夜。然后在4℃下35 000 r/ min 离心15 min, 广东省地税弃上清。所得沉淀再用预冷的丙酮清洗3~ 5 次, - 20℃ 下冷
冻干燥备用。
3、适于水稻根、叶、悬浮细胞总蛋白质分析的高分辨率双向电泳方法
取1~ 2 g 材料于液氮中充分研磨, 加入10 mL 预冷的含avalon总线10%三( TCA) 、0 . 07%DT T 的丙酮, 充分混合后-20℃ 下放置1 h, 35 000× g 下离心15 min。在沉淀中加入10
mL 预冷的含0. 07% DT T 的丙酮, 充分混合, - 20℃ 下放置1 h, 12 000× g 下离心15 min, 重复该步骤2~ 3 遍。沉淀冷冻干燥( FREEZE DRYER 4. 5, LABCONCO, 美国) 后放于- 75℃ 下, 或直接进行下一步提取。取适量样品粉末, 按20μL/ mg 的比例加入蛋白裂解液( 9 mol/ L 尿素, 4% CHAPS,1%IPG 缓冲液, 1%DTT , 35 mmol/ L Tr is) , 30℃ 水浴1 h, 并不时振荡, 12 000× g 下离心10 min。上清液中加入4 倍体积的预冷丙酮, 穿墙记于- 20℃ 下放置至少2 h, 4 000× g 下离心10min, 沉淀用水化缓冲液( 8 mol/ L 尿素, 2% CHAPS, 20mmol/ L DTT, 0. 5%IPG 缓冲液) 溶解, 重复该步骤1~ 2 遍。样品溶液存于- 75
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