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核蛋白提取法

Buffer A： HEPES (pH 7.9) 10Mm
MgCl2 1.5mM
KCl 10mM
Buffer C: HEPES pH 7.9 20mM
MgCl2 1.5mM
NaCl 420mM
EDTA 0.2mM
Glycerol 25%,v/v
用前加入0.5ul 1M的DTT，2ul 100mM的PMSF以及在每ml Buffer中加入10ul 蛋白酶抑制剂。
100 mM PMSF：174.2mg PMSF+10ml 水
步骤为：
1．用冷D-PBS洗两次细胞
五纵七横2．刮除细胞入1ml D-PBS中
3．离心细胞合胞病毒3000rpm，5分钟

4．血粘用400ul Buffer A重悬细胞，并上肿胀细胞10分钟，vortex10秒
5． 1000rpm离心10秒，弃上清hca2
6． 12000rpm离心5分钟，弃上清
7．重悬细胞在50-100ul Buffer C中，置于冰上20分钟
8． 12000rpm离心5分钟，转移上清于另一EP管中
9．定蛋白，分装于-70℃保存

0.5M EDTA
1M 碳酸钠：3.277g+ 20ml H2O
Buffer A: HEPES (pH 7.9) 0.28698g
1M MgCl2 0.15ml
1M KCl 1ml
H2O to 100ml
Buffer B HEPES (pH 7.9) 0.57396g
还原糖1M MgCl2 0.15ml

NaCl 2.45448g
(10mM) EDTA 2ml
Glycerol 25ml
H2O to

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本文发布于:2024-09-20 15:00:56，感谢您对本站的认可！

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