取0.2 g-1 g 番茄样品，液氮速冻，研磨成粉末保存在-80℃（鲜样也可直接在冰浴中用偏磷酸研磨）。测定时在样品中加入5 ml 预冷的0.1% (w/v) HPO3 溶液，抽提半小时左右，4℃ 12000 g离心10min, 上清液转移到新离心管中，置于冰上。在300 ul 上清液中加入等体积50 Mm DTT（二硫代苏糖醇）, 暗处常温反应15min, 测出总抗坏血酸含量；加入等体积0.1% (w/v) HPO3，测出还原态抗坏血酸含量；两者的差值即为氧化态抗坏血酸含量。 液相谱使用方法：将装好流动相和甲醇的瓶放好，打开电源后打开230机器开关，机器自检，再将电脑打开；首先进行排气（流动相B及甲醇A，排气速度10 ml/min），旋开旋钮，点击“start” 、“pump” 、“1978年12月发生了什么大事
A”, A开始排气，直到没有气泡为止，点击“stop”, 接着点击“start” 、“pump” 、“B”, B开始排气，直到没有气泡为止，点击“stop”同时旋紧旋钮，排气结束；接着进行洗柱，（洗柱流速0.5 ml/min），点开位于电脑桌面左上方的3个电脑图标，点击“instrument”, 打开其中的“230”, 点击“method”, 先用甲醇洗，设置A为100 %, 关闭对话框并确认修改，半小时或更长时间后设置A 为50 %, B为50 %, 洗柱半小时，结束后设置B为100 %, 洗柱10 或20 min 后将流速改为测定时流速1.0 ml/min继续洗柱；洗柱过程 中可将检测器310打开，使基线平衡；最后是洗针，打开上样器410 , 更换新的洗针液（新鲜配制的0.1% HPO3 溶液），点击“wash” 即开始洗针直到没有气泡为止，洗针结束后点击第三个键使其联机。100% B 洗柱1 h后可开始测定样品；样品测定完毕后按照100 % B（20 min） 、50 % A 50 % B(20 min)、100 % A （30 min）的顺序洗柱，完毕后关闭软件，接着关闭230、310、 410。
每天都需重新测定标样，绘制标准曲线；样品于10ml离心管中离心后，红熟果实样品不需再离心，其他如叶片、未成熟果样品、根、茎等都需将上清吸出后再次离心方可进行微孔滤膜抽滤；测定时采用全进样（100 ul），波长设定为254 nm；使用的所有溶液均为dd H2O配制，流动相为PH4.5 0.2mol.L-1的醋酸缓冲液，需经真空泵抽滤（以前使用的滤膜孔径为0.22 umgct考试
）,流动相瓶需用dd H2O多次清洗干净，每天都必需重新配流动相；测定时需用到的DTT、HPO3 溶液同样需要微孔滤膜抽滤；在取样品及DTT、HPO3时，由于已不太准确，可每次吸样时均吸到黄头中间的分界线处即可。 PH4.5 0.2mol.L-1的醋酸缓冲液的配制：
民商法论丛
可先配好0.2mol.L-1 NaAc（每升加27.22 g NaAc.3H2O固体）和0.2mol.L-1 HAc溶液（每
倍加乐升中加11.5 ml冰乙酸），每配我为人民鼓与呼500 ml所需流动相时取 215 ml NaAc 和285 ml HAc溶液即可。
DTT即DL-Dithiothreitol，二硫苏糖醇。C4H10O2S2，分子量为154.25。
50 mM DTT配制方法：
需溶解在PH 5.2 0.01mol/L NaAc溶液中，抽滤后分成小管保存于- 20℃。配50 ml 50 mM DTT需0.3855 g DTT粉末。
200 ml PH 5.2 0.01mol/L NaAc溶液配制方法：
取7.9 ml 0.2mol.L-1 NaAc 及2.1 ml 0.2mol.L-1 HAc溶液，定容至200 ml中子测井即可。
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