试剂盒：TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit
实验前准备：制冰，操作台和研钵及研磨棒用酒精及Rnase Free DH2O擦拭 实验操作全程带手套（酒精及Rnase Free DH2O擦拭）和口罩
试剂盒包括2部分
第一部分：50x DTT Solution 700μl
Recombinant DNase I(RNase-free;5U/ml) 1000U
10x DNase I Buffer 1ml
第二部分：Buffer RL 32ml
Buffer RWA 28ml
Buffer RWB 30ml
RNase Free DH2O 15ml
gDNA Eraser Spin Column 50
RNA Spin Column 50
Collection Tube(2ml) 50
Rnase Free Collection tube(1.5ml) 50
注：包含强变性剂。注意避免与皮肤和眼睛接触
第一次使用kit之前，加入70ml 100%乙醇到Buffer RWB. 试剂盒第一部分在-20℃下保存，第二部分在室温（15-25℃）保存。 使用前注意：1、Buffer RL若出现沉淀，请于60℃加热溶解，待恢复至室温后使用。
2、操作前在Buffer RL中加入50x DTT Solution至浓度为2%，即每1ml的Buffer RL中加入20μl的50x DTT Solution。此裂解Buffer最好现配。
3、Buffer RWB在首次使用前，添加70ml的100%乙醇，混合均匀
4、gDNA Eraser Spin Column和RNA Spin Column的最大容积为600μl，使用时如果液体的体积超出最大容积，请分批加入
daas 5、实验操作如无特殊说明，均在室温进行
局面 江歌实验操作：
RNA提取
1.在 1.5mL灭菌tube中加入500μl Buffer RL（已加入50×DTT Solution），插在冰上备用。
两脚离合器2.将样品使用漏斗及滤纸过滤后，称取50-100mg转移至研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状。将研磨成粉末状的样品加入到1中。用移液反复吹打至裂解液中无明显沉淀
3.将裂解液12000rpm，4℃离心5min。
4.将gDNA Eraser Spin Column安放到2mL的Collection Tube上。将上清液转移到gDNA Eraser Spin Column中。
5.12000rpm，离心1min。
6.弃gDNA Eraser Spin Column。保留2mL Tube中的滤液。加入等体积的70%
的乙醇（可能会出现沉淀），是用移液将溶液混合均匀。
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7.立即将混合液（含沉淀物）全部转入到RNA Spin Column中（体积不要
大于600μl）
8.12000rpm，离心上海电视大学浦东分校1min，弃滤液。
【注】：如果混合液大于2016年5月11日600μl，分批加入（即离心后将剩余的加入再进行离心）
9. 加入500μl的Buffer RWA，12000rpm离心30s，弃滤液。
10.加入600μl的Buffer RWB（沿管壁四周加入），12000rpm离心30s，弃
滤液。
11.DNase I消化：
①反应液配制：5μl 10×DNase I Buffer，4μl Recombinant DNase I，41μl RNase-free dH2O到新的1.5mL Tube中，混合均匀。
②向RNA Spin Column膜中央加入50μl DNase I反应液，室温静置15min。
③向RNA Spin Column膜中央加入350μl Buffer RWB，12000rpm离心30s，弃滤液。
12.重复步骤10
13.空转，12000rpm离心2min。
14.将RNA Spin Column安置于1.5mL的RNase Free Collection Tube（试剂盒内提供），在膜中央加入50μl的RNase Free dH2O，静置5min。
15.12000rpm离心2min洗脱RNA。
16.若想提高RNA的收量，再加入50-200μl的RNase Free dH2O，洗脱RNA；
若要得到高浓度RNA，也可将第一次的洗脱液重新加回到RNA Spin Column中，室温静置5min，12000rpm离心2min洗脱RNA
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