(一)血型鉴定常见问题
ABO血型鉴定是即指ABH血型抗原
的检测。红细胞含A抗原的叫A型，含B抗原的叫B型，含A和B抗原的叫AB型；不含A、B抗原，而含H抗原的称O型。Rh血型鉴定一般指Rh系统中D抗原的检测，根据病人红细胞
是否带有D抗原，分为Rh阳性
和Rh阴性
。 生理盐水凝集法
（1）生理盐水凝集法：①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。 （2）凝胶微柱法
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是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。
抗A、抗B和抗AB标准血清标准
准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1：4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。
注意事项
1.所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。为避免交叉污染，建议使用一次性器材。标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。
2、加试剂顺序：一般先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。
3、虽然IgM抗A和抗B与相应红细胞的反应温度以4℃最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般在室温20℃～24℃内进行试验，而37℃条件，可使反应减弱。
4、幼儿红细胞抗原未发育完全、老年体弱者抗原性较弱，最好采用试管法鉴定血型。
5、玻片法反应时间不能少于10min，否则较弱凝集不能出现，造成假阴性。
6、正、反定型结果一致才可发报告。
7、反定型法：先天性免疫球蛋白缺陷，长期大量应用免疫抑制，血型抗体可减弱或消失；血清中存在自身免疫性抗体、冷凝集素效价增高、多发性骨髓瘤、免疫球蛋白异常均可造成反定型困难；新生儿体内可存在母亲输送的血型抗体，且自身血型抗体效价又低，因而出生6个月以内的婴儿不宜做反定型。老年人血清中抗体水平大幅度下降或被检者血清中缺乏抗A及（或）抗B抗体，可引起假阴性或血型鉴定错误。
我们日常血型鉴定工作中经常会碰到正反定型不一致的情况。有技术和管理上的问题，也有标本红细胞或血清本身的问题，具体分析主要有以下原因：
一、技术和管理错误；这是ABO定型试验中产生异常结果的主要原因，包括：
1.标本和试剂搞错；
2.器材不洁；
3.试剂污染或失效；
4.离心过度或不足；
5.阳性反应产生溶血现象未能识别；
6.漏加试剂；
7.结果记录或判断错误；
8.细胞与血清间比例不当。
二.正定型出现的问题
1.红细胞致敏：受免疫红细胞致敏的红细胞，在含高蛋白介质的试剂中，可发生凝集。
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2.异常基因型：ABO亚型的检测中，A/B抗原可能为弱抗原，难以检出。
3.近期输血：试验前曾经输入其它ABO血型不一致的血液，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定型时显示“混合外观”现象。
4.嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞体，定型时可出现“混合外观”现象
5.疾病因素导致抗原减弱：某些白血病和难治的贫血患者中，ABO血型系统的抗原可能受抑制，检出困难。
6.红细胞的多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集现象。获得性“类B”活性：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。
7.血型特异性物质过高：血型物质的浓度过高，可以中和抗A和抗B定型试剂，要得到正确的正定型结果，必须多次洗涤红细胞。
8. 异常的血浆蛋白：受血者血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例，高浓度的纤维蛋白原等问题，能导致红细胞钱串状形成，造成假凝集现象。
9.药物因素：药物、右旋糖酐及静脉注射某些造影剂可引起红细胞的聚集而类似凝集。
三.反定型出现的问题
1.血清异常：脐血Wharton胶或血清蛋白引起 钱状形成，影响反定型结果。
2.近期内进行大量的血浆置换：由于使用大量非同型的血浆置换，标本血清中含有所输供体的抗A抗B抗体，造成反定型错误。
3.不规则抗体的存在：受检者血浆中，含有ABO血型抗体以外的不规则抗体，与试剂A/B细胞上的抗原反应。
4.低蛋白血症：低丙种球蛋白症，可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集反应
5.年龄因素：在尚未产生自身抗体的婴儿或由母亲被动获得抗体的婴儿以及抗体水平下降的老人，试验时可出现异常的结 果。
6.防腐剂因素：患者可能含有对防腐剂中的成分或对混合介质的抗体，导致ABO定型差错。
导致Rh血型鉴定出现假阳性的原因主要有：
1.受检细胞已被免疫球蛋白致敏，或标本血清中含有引起红细胞凝集的因子。
2.受检细胞与抗血清孵育的时间过长，含高蛋白的定型试剂会引起钱串状形成。
3.标本抗凝不当，受检过程中出现凝血或出现小的纤维蛋白凝块，误判为阳性。
4.定型血清中含有事先未被检测的其他特异性抗体，造成假阳性定型结果。
5.多凝集细胞造成定型的假阳性。
6.鉴定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。
(二)交叉配血常见的问题
交叉配血试验的内容包括:
1.主侧配血,即受血者血清对供血者红细胞,它是检测对供者红细胞起反应的抗体;
2.次侧配血,即受血者红细胞对供血者血清,它是检测对受血者红细胞起反应的抗体;
3.自身对照,受血者红细胞对受血者血清,目的是显示自身抗体.直接抗球蛋白试验阳性及红细胞缗钱状假阳性的存在.
我不是最弱小的教学设计交叉配血试验常用方法
除了盐水介质法外,还应有聚凝胺法.酶法.抗球蛋白试验.清蛋白介质.低离子强度介质.凝胶试验等方法.盐水介质法只能检出ABO.MN等系统的抗体,而不能检出Rh.Kell.Kidd等系统抗体。前者多为IgM球蛋白，后者由免疫产生属IgG球蛋白。凝聚胺法对Kell系统之外的大多数血型系统敏感高且操作简便，快速，对Rh系统特别敏感，我国以Rh系统引起的迟发性溶血性输血反应最为常见。在欧美国家，除ABO，Rh系统外，抗Kell是最常见的免疫抗体。
在交叉配血试验中，可能出现下列问题：
1，缗钱状的形成，血清在室温和37摄氏度中，使红细胞出现假凝集，造成配血错误，常见于多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症，霍奇金病，以及其他表现为血沉加速的一些病例中。
2，交叉配血试验结果不相容，显示有未检出的同种抗体的存在。。access2000下载
检索词3，在室温反应中，显示有自身抗体。
4，在抗球蛋白试验中显示有自身抗体
5，存在抗体筛选试验阴性和交叉配血结果阳性的现象，提示可能有未检出的抗体存在
6，交叉配血试验中，离心力不当，造成可假阴性和假阳性
7，水箱温度不正确，造成错误结果
8，蒸馏水中某些离子，造成不正确的结果
9，红细胞不正确的洗涤和悬浮，使抗球蛋白试验出现假阴性
10，血清中如含有溶血性抗体，则相应红细胞被溶解而不是凝集，交叉配血结果应为阳性，如果血清中存在补体而溶血，血清应灭活后再做试验。
交叉配血操作制度
1.受血者配血标本必须是输血前3天内采集的，无溶血、无重脂、无细菌生长。 2.送标本时，《临床输血申请单》和受血者标本二者不分离。
3.交接标本时，逐项核对《临床输血申请单》所记录内容与受血者标本是否一致。
4.凡输注红细胞类成分必须做交叉配血试验，输注血小板一般情况下同型相输（特殊情况除外），输注血浆和冷沉淀可不做交叉配血试验，但必须同型或相容。
5.配血前，按标准操作规程再次复查受血者和供血者ABO和Rh(D)血型，ABO血型作正反定型，Rh(D)血型鉴定最好用两个厂家试剂，供血者为Rh阴性者应进一步作DU鉴定，如鉴定结果为DU，该血只能作为Rh阳性血输给患者。如果受血者为Rh阴性可不作DU鉴定，因为受血者无论Rh阴性或DU都输Rh阴性血液。遗传与变异
6.配血时，严格按标准操作规程操作，认真观察结果、先肉眼观察后，再用显微镜观察，主侧和次侧应无凝集或无溶血。如果受血者同时输多个血，必须将每个献血者之间血液作交叉配血试验，发现不相合时，该血液不得输入受血者体内，查原因后，作进一步处理。
7.配血时应有一人（一人值班除外）专门负责监督和复核受血者和供血者血标本是否准确，配血结果是否可靠，《配血试验报告单》字迹是否工整，填写是否完整、准确，决不允许张冠李戴，出任何错误
8.凡遇下列情况必须按有关规定作不规则抗体检查：(1)交叉配血不合时；(2)有输血史、妊娠史或短期内需要接受多次输血者。
9.严格临床输血核对制度，输血前病人至少作两次血型鉴定，且前后相符。交叉配血过程必须做3次核对，即配血前、配血中、配血后核对。
10.严格血样保留制度，标本及配血管保存至少7天，特殊病例分离血球、血清冰箱保存。
自身抗体的血清学检查
血清中存在的不规则抗体可分为2类：一类是同种抗体，一类是自身抗体。自身抗体又可分为冷自身抗体和温自身抗体2类，自身抗体一般无特异性，可凝集自身红细胞以及所有人的红细胞，因此往往影响血型的正确定性。
1，冷自身抗体
通常是IgM类的抗体，能在盐水介质中和自身红细胞反应，理论上讲，凡是37摄氏度与自身红细胞不反应，而只有在<37摄氏度环境下才能和自身红细胞反应的抗体均可称为自身
抗体。实际上，冷自身抗体大多数只能在很低的温度喜爱与自身细胞反应。因此，尽管大多数人的血清中都存在冷自身抗体，但在体内温度下，不会喝自身细胞发生反应，也不会造成任何不良影响。
2，温自身抗体
温自身抗体是指在37摄氏度条件下能和自身红细胞反应的抗体。当患者血清中含有温自身抗体时，患者一般均有贫血或溶血症状，温自身抗体可分为2类：大多数情况下为IgG 类温自身抗体，极少数情况下也会存在IgM性质的温自身抗体。
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