作者：杜淑娟，彭贝如，陈秀梅【摘要】【目的】观察益智宁神口服液对抽动—秽语综合征(TS)模型大鼠神经生物学和行为学的影响。【方法】选用SPF级SD大鼠60只，随机分为空白组、模型组、中药组(益智宁神口服液，剂量为2mL/d)、西药组(氟醇，剂量为015mg/d)。除空白组外，其他组均采用亚氨基二(剂量为150mg·kg-1·d-1)腹腔注射复制TS大鼠模型，造模后第2天开始按设计剂量给药，观察各组大鼠运动行为及刻板运动评分，采用高效液相谱法检测14d后各组大鼠脑组织多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)的水平。【结果】模型组运动行为、刻板运动积分以及脑组织NE水平均显著升高(P001)，DA水平显著降低(P001);中、西药组14d后均可降低大鼠运动行为、刻板运动积分及脑组织NE水平，升高脑组织DA水平，与模型组比较差异均有显著性意义(P005或P001)，提示中药组作用与西药组相仿。【结论】益智宁神口服液TS的作用与其能调整中枢神经递质的水平有关。【关键词】益智宁神口服液/药理学;抽动—秽语综合征/中药疗法;神经递质;疾病模型，动物;大鼠;谱法，高压液相抽动—秽语综合征(Tourettesyndrome，TS)，又称多发性抽动症，是一种儿童期发病的慢性类
神经精神障碍性疾病。临床表现主要为突然、快速、反复、非节律性、不自主和刻板的运动性抽动和发声性抽动，还可能伴有各种行为紊乱、强迫观念与行为、认知障碍等，可不同程度地干扰和损害儿童的认知功能，影响社会适应能力。本病病因尚未明确，具有明显的遗传倾向，多见于4～12岁的儿童，患病率约为005%～3%，近年来发病呈明显上升趋势，男孩多于女孩1]。广东省中医院儿科在临床实践中运用自拟方益智宁神口服液该病，取得了较好的疗效2]。本实验应用亚氨基二腹腔注射建立抽动—秽语综合征模型大鼠，观察该药对模型大鼠行为学和神经生物学的影响，现报道如下。
1材料与方法
11实验动物SPF级SD大鼠60只，28～30d龄，体质量(250±10)g，雌雄各半。由广东省医学实验动物中心提供(许可证号:粤监证字2008D006，批号：0037766)。
12实验药品亚氨基二(iminodipropionitrile，IDPN)购自AlfaAesar公司(批号：C7323A)，中药益智宁神口服液(由广东省中医院提供，批号：080201)，对照药物为氟醇(上海信谊九福药业有限公司，批号：08031121)。
麦肯锡病毒唑注射液13仪器及试剂LC26A型高效液相谱仪、SPD26AV荧光检测器、C2R4A数据处理机均为日本岛津公司产品，脱水机、包埋机、切片机和生物显微镜等设备为德国Leica公司产品，
微量组织匀浆器为Millipore公司产品，ZH蓝星C/s型脑立体定位仪，高氯酸、乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2)均为分析纯，甲醇为谱纯，对照品由中国药品生物制品所提供。
14模型复制参考Wakata3]的方法，将亚氨基二溶解于生理盐水，稀释成浓度100mg/mL，给药途径为腹腔注射，剂量为150mg·kg-1·d-1，每天1次，共用7d。
15分组及给药选用SD大鼠随机分为4组：空白组和模型组各10只，中药组和西药组各20只，每组均雌雄各半。组在造模后第2天开始给药，中药组按20kg的儿童每天口服20mL益智宁神口服液的比例计算，每只大鼠灌胃约2mL/d;西药组按20kg的儿童每天口服氟醇片1mg的比例计算，每只大鼠灌胃约015mg/d，连续14d。
16大鼠行为观察4]采用观察评分，每次至少观察1h，主要诱发症状为运动行为和刻板运动。(1)运动行为评分：0分：安静或正常活动;1分：能过度兴奋;2分：探究行为增加;3分：跑;4分：跑和跳;(2)刻板运动(或定型运动)评分：0分：无刻板运动;1分：旋转行为;2分：头和颈部的上下运动过多;3分：头、颈部的上下运动过多加旋转行为;4分：头向侧摆合并头和颈部的上下运动过多。
17神经递质水平检测5]第14天将所有实验大鼠迅速断头处死，借助脑立体定位仪，取右脑海马组织及边缘系统(包括纹状体、隔核、层壳核、基底节、齿状回)，精确称质量，置
入1mL处理液(含01mol/L高氯酸和05g/LEDTANa2)中，微量组织匀浆器冰溶下匀浆，4℃冰冻离心10000r/min，取上清液置入-20℃保存。采用高效液相谱法测定多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)浓度。测样时，室温下解冻，进样20μL，以峰面积外标法定量。
18统计学方法采用SPSS130和SAS913版本进行统计学处理和分析，各组神经递质水平检测数据分别进行方差齐性和正态分布检验，方差不齐采用秩和检验，检验水平α=005。
uim2结果
21各组行为学观察和评分各组前后运动行为和刻板运动积分见表1。模型组行为学评分与空白组比较，差异有显著性意义(P001)，表明造模是成功的。
14d后，中、西药组运动行为积分和刻板运动积分降低，与模型组比较差异有显著性意义(P005或P001)，表明中药组和西药组对动物行为均有明显改善作用，中药组效果与西药组相仿。
22各组前后脑组织DA、NE含量变化比较表2结果显示：模型组脑组织DA水平降低，NE水平升高，与空白组比较差异均有显著性意义(P001);14d后，中、西药组均可显著升高DA水平，降低NE水平，与模型组比较差异均有显著性意义(P005或P001)，中
药组作用与西药组相仿。表1各组前后运动行为和刻板运动积分比较(x±s)表2各组前后神经递质水平比较
3讨论煤矿防爆绞车
IDPN是一种中枢神经毒素，50年代以后就用于神经病理学的研究，本研究参考Wakata3]的方法复制模型，从神经生物学和行为学两方面观察药物对TS模型动物临床行为学典型特征的影响。IDPN诱发TS模型大鼠出现明显刻板运动和运动行为异常，如过度兴奋、探究行为、异常跑跳、旋转行为和头颈部上下侧摆等动作均具有TS临床行为学的典型特征，有时出现连续的嗤鼻、抬举上肢等动作，类似于人类TS患儿喉部发声、耸肩等特征行为。本研究通过对药物前后TS模型大鼠运动行为和刻板运动行为评分的比较，发现中药组在改善动物TS典型特征行为方面效果明显，如头部、颈部的抽动减轻，旋转行为明显缓解，每次异常行为发作持续时间缩短，异常抽动次数消失，异常跑动及不规律的弹跳运动明显减少。淮安pm2.5
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