免疫组化(组织切片)

免疫组化(组织切片
取组织后福尔马林固定,自动脱水机脱水过夜,石蜡包埋,切片,捞片,将标本贴于玻片上。
将石蜡切片置于80℃烤箱中30min,冷却至室温,溶解石蜡
脱石蜡:将切片置于二甲苯(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)中,分别作用15、15、10min,进一步脱石蜡
脱水;将切片置于梯度酒精100%、95%、90%中,分别作用3min。蒸馏水中轻轻晃动漂洗。
宗教学eds抗原修复:将标本放在高压锅中,在高压锅中加入抗原修复液(柠檬酸1.89g,柠檬酸钠12.06g稀释至5000ml)使抗原修复液覆盖标本,高压锅放气后记时2min,关电源3min后浇水冷却。(在微波炉抗原修复液及玻片,另外放入一盆水,high火加热10min,出现水气后调到defrost。)
阻断:蒸馏水轻轻晃动漂洗后,3%H2O2室温30min(3%H2O2微波low火孵育2min),阻断内源性生物素。
PBS冲洗3次,每次5min。甩干或擦干后用油性笔圈画组织。滴加血清后室温放置10min。
弃去、甩干血清(不用漂洗),滴加一抗,将样本放与孵育盒,在孵育盒中放入水(预防抗体挥发),4℃冰箱过夜(或37℃2h)。
将样本取出后,室温复温后37℃温箱孵育35min。FANPN
PBS漂洗3次,每次5min。
滴加二抗,37℃温箱孵育15min,PBS漂洗3次,每次15min。
滴加三抗,37℃温箱孵育15min,PBS漂洗3次,每次15min。
2001年高考分数线甩干后滴加显剂,反应5~30min,将切片置于水中终止反应。
冲洗后将切片中放入苏木素中,复染2min,浸泡于热水中至切片发蓝。螨类
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置于酒精中浸泡,用吹风机,置于烤箱中。
抗原修复的意义:组织用福尔马林固定后,蛋白质发生交联,石蜡包埋后,蛋白质形态发生变化。这样的处理导致部分抗原决定簇被遮蔽。抗原修复的目的在于改善以上状况。
抗原修复的效果取决与修复液的成分及pH,0.01mol/l,pH 6.0的柠檬酸钠较为常用。可用微波、高压、水浴、蒸气。另外可用酶消化法进行抗原修复。
制作HE片
取组织后福尔马林固定,自动脱水机脱水过夜,石蜡包埋,切片,捞片,将标本贴于玻片上。
烤箱65℃30min烘干(或电吹风15min吹干)。
梯度酒精95%~95%~80%分别2~3min,用水冲洗至切片透明。
苏木素染6min后用水冲洗,盐酸酒精蘸过后用水冲洗。泛蓝后用水漂洗7~8min。
伊红染3min后用水漂洗。
酒精梯度80%~95%~95%片刻,纱布吸干。
石炭酸二甲苯脱水2~3min,透明二甲苯中1~2min,透明二甲苯中1~2min。
树脂封片,保持玻片的湿度。

本文发布于:2024-09-21 11:04:57,感谢您对本站的认可!

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标签:修复   抗原   切片
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