授课对象：11级检验1-5班
朱蒙下载课时：2学时飞利浦220cw9
——亚铁嗪比法
【实验目的】
1．掌握亚铁嗪比法测定血清铁的原理及注意事项
2．规范地进行血清铁测定
3．了解血清铁测定的主要临床意义
【实验用品】
722型分光光度计，离心机，轻质MgCO3粉末，甘氨酸/盐酸缓冲液，铁标准应用液，血清
【实验原理】
玛戈皇后下载血清铁和运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，在被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红化合物，在波长562nm处有一吸收峰，与同样处理的标准液比较，即可求得血清铁含量。直接测定法应纠正血清本身的度，故应设血清空白。 总铁结合力（TIBC）是指血清中的运铁蛋白全部与铁饱和。将铁标准液加到血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合成复合物，多余的铁被轻质碳酸美粉末吸附除去，然后测定血清中的总铁含量，即为血清总铁结合力。
【操作步骤】
衣原体包涵体1．血清铁直接测定法
血清铁操作步骤
加入物/ ml 测定管标准管空白管
血清0.45 — — 35.8μmol/L铁标准应用液— 0.45 —
去离子水— — 0.45
甘氨酸-盐酸缓冲液 1.2 1.2 1.2
将各管混匀，以562nm 波长比，空白管调零，读取测定管的吸光度（称血清空白）。然后再向各管加入亚铁嗪显液0.05ml ，充分混匀，1小时后仍以562nm 波长比，空白管调零，读取各管的吸光度。
【计算】
)L /mol μ(8.35×A )
97.0×A (A L /mol μS
B U
血清）＝
血清铁（
由于两次测吸光度时溶液体积不同，故应将血清空白管吸光度乘以0.97，作为校正。
2．血清总铁结合力测定法 于一具塞试管中加入血清0.45ml ，铁标准液（Fe179μmol/L ）0.25ml 和去离子水0.2ml ，混匀，放置试温10分钟后，加碳酸镁粉末约20mg ，再放10分钟，振摇数次，随后经2500r/min 离心10分钟，上清液备用。另取3支试管，按下表操作。
血清总铁结合力测定操作步骤
加入物（ml ）
测定管 标准管 空白管 上清液
0.45 — — 35.8μmol/L 铁标准应用液 — 0.45 — 去离子水
— — 0.45 甘氨酸-盐酸缓冲液
1.2
1.2
1.2
将各管混匀，以562nm 波长比，空白管调零，读取测定管的吸光度（称血清空白）。然后再向各管加入亚铁嗪显液0.05ml ，充分混匀，1小时后仍以562nm 波长比，空白管调零，读取各管的吸光度。
L /mol μ6.71×A 97.0×A A =
L /mol μS
B U ）
（血清）血清总铁结合力（
【参考范围】 1．血清铁
成年（男）11~30μmol/L ； 成年（女）9~27μmol/L 。 2．血清总铁结合力 成年（男）50~77μmol/L ； 成年（女）54~77μmol/L 。
【注意事项】
1．所用试剂要求纯度高，含铁量要很少。
2．所用之水必须经过离子处理。
3．由于血清铁含量极微，操作时必须注意防止铁的污染。玻璃器皿须用10%（V/V）盐酸浸泡24小时，取出后用去离子水冲洗干净方可用。
4．采血时应防止溶血，因红细胞内含铁远高于血清，即使有轻度溶血，也将大大影响结果的准确性。
【临床意义】
1．血清铁增高见于因红细胞大量破坏的溶血性贫血；因红细胞再生或成熟障碍而导致的再生障碍性贫血、巨幼红细胞性贫血；因铁利用率太低的铅中毒或维生素B6缺乏引起造血功能低下，等等。
2.血清铁低下常见于缺铁性贫血、急性或慢性感染、恶性肿瘤等。
3.血清总铁结合力增高见于缺铁性贫血、急性肝炎等。
4.血清总铁结合力降低见于肝硬化、肾病、尿毒症和素沉着症等。挠度计算
课后小结：
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