摘要】 目的 探讨SSTR2在结肠腺瘤型息肉的表达及临床意义。方法 采用免疫组化EnVisionTM二步法检测SSTR2亚型蛋白在对照组织、结肠腺瘤型息肉及结肠腺癌组织中的表达。结果 SSTR2在结肠癌中的阳性率为20.5％，高、中分化腺癌中阳性表达高于低分化腺癌（P＜0.05），低、中分化腺癌明显低于高分化腺癌（P＜0.03），与临床分期及浸润深度没有明显差异(各组之间均P>0．05)；对照组结肠黏膜中的阳性率为71.4％，腺瘤中轻度不典型增生阳性率为59.5％；中重度不典型增生阳性率为41.5 ％。SSTR2在结肠腺瘤型息肉和正常结肠粘膜组织表达无明显差异（P＞0.05）。结肠腺瘤型息肉的中、重度不典型增生低于轻度不典型增生（P＜0.05）。SSTR2在结腺癌中的阳性率及表达强度最低，显著低于结肠腺瘤型息肉（P＜0.01），结肠腺瘤型息肉的中、重度不典型增生明显低于轻度不典型增生（P＜0.05）。结论 SSTR2的阳性表达及表达强度对诊断结肠腺癌和监视结肠腺瘤型息肉癌变有重要意义。 【关键词】 SSTR2 结肠腺瘤型息肉 结肠腺癌 免疫组织化学 To Continuously Improve Quality of Healthcare Service and Fully Ensure Safety of Patients dxs 【Abstract】 Objective To investigate the expression of somatostatin receptor SSTR 2 in human colorectal cancers ,adenoma and normal tissues and discuss the relationship between the xpression and characteristics of the tumor．Methods Immunohistochemistry technique was used to demonstrate somatostatin receptor SSTR 2 expression in human colorectal cancers , adenoma and normal tissues．The relationship between the expression rate of SSTR 2 and the clinicopathological parameters was analyzed．Results The antibodies sperifically detected the receptors in human colorectal cancers, adenoma and normal tissues. The expression rate of SSTR 2 in the specimens of colorectal cancers was 20.5% ,The expression rate of SSTR 2 in normal tissue was 71.4%．There was significant difference between the two group (P<0.01). The expression rate of SSTR 2 in the specimens of low-grade atypical hyperplasia was68.2% ,The expression rate in high-grade atypical hyperplasia was28.6 %．There was significant difference between the two group（P<0.01). Conclusions SSTR 2 is expressed in human colorectal cancers, adenoma and normal tissues. Determination of SSTR2 may be of value in the diagnosits as well as in the progression
汪天云of colorectal cancer.永不磨面的
【Key words】 somatostatin receptor colorectal cancer immunohistochemisty
引言黑客社会工程学攻击
多项研究提示80％ 以上的结直肠癌是由结肠腺瘤型息肉演变而来，其发病机理尚不明确。近年来的研究表明，生长抑素对包括大肠癌在内的多种消化道恶性肿瘤细胞的生长有抑制作用，其中生长抑素Ⅱ型受体(SSTR2)在介导抗肿瘤增殖中起了很重要的作用。在本研究中，我们分别检测SSTR2在对照结肠粘膜组织，结肠腺瘤、结肠癌中的表达，探讨SSTR2在结肠腺瘤息肉癌变发生、发展中的表达情况，有助于推测结肠腺瘤息肉的生物学行为发展趋势，早期判断其癌变倾向，并判断其预后。
1 材料与方法
1.1 一般资料
标本为淄博市中心医院病理科（作者工作单位）2005年3月至2010年3月收检的手术及内镜下电切结肠腺瘤型息肉63例（男37例，女26例），平均年龄50.7岁，其中轻度不典型增生22例，中、重度不典型增生41例；选取28例（男10例，女18例）对照结肠组织(距肿瘤边缘10 cm以上)（男18例，女10例）及39例（男25例，女14例）结肠癌手术标本作为
对照，患者平均年龄48.6岁；结肠癌组织（男22例 ，女17例）均来自未接受过任何化疗、放疗和免疫并且无其他组织原发肿瘤的患者，患者平均年龄68.5岁。
1.2 标本和试剂
130例患者的石蜡组织块制作厚4um连续切片。每份标本常规苏木素一伊红(HE)染，进行组织形态学观察和细胞分化程度判断。羊抗人SSTR2多克隆抗体(浓缩型、Santa Cruz Biotechmlogy公司)； SP免疫组织化学试剂盒(第二抗体为通用型生物素标记的羊抗兔或鼠IgG)、DAB显剂等(福州迈新生物技术公司)。
1.3 实验方法
应用免疫组织化学方法(SP法)检测上述结直肠癌、结肠腺瘤、正常结直肠黏膜中生长抑素受体2亚型的表达。sP法简述如下：石蜡切片经常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化；柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复；滴加过氧化酶阻断液室温10 min，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗后滴非免疫性动物血清室温10 min，滴加第一抗体即抗SSTR抗体(抗ssTR2抗体稀释度为1：400)，4℃冰箱孵育过夜；PBS冲洗后滴加生物素标记的第二抗体室温10 min；PBS冲洗后滴加链霉素亲和素．过氧化物酶溶液室温10 min，PBS冲洗后DAB显，冲冼，苏木素复染，封片，显微镜观察。每次实验用已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作为
阴性对照。
1.4 结果评估
根据结直肠癌细胞和正常结直肠黏膜上皮细胞阳性细胞数和着深度计分，每例随机观察5个高倍镜(×400)视野。阳性表达细胞数<5％为0分，5％～24％为1分，25％～49％为2分，50％～74％为3分，≥75％为4分。阳性细胞表达的着深度：基本不着为0分，淡黄为1分，黄为2分，棕黄3分。两者得分相乘，<1分的病例判定为表达阴性，其余的病例判定为表达阳性。
1.5 统计学方法
采用x2检验，所得数据应用SPSS 11.5统计学软件进行处理。
2 结果
2.1 SSTR2在不同结肠病理组织上皮中的表达
39例腺癌中阳性8例，阴性31例，表达率为20.5％；63例腺瘤中阳性32例，阴性31例，表达率为50.5％；对照结肠黏膜阳性20例，阴性8例，表达率71.4%，SSTR2在结肠腺瘤和对照结肠粘膜组织表达无明显差异（P＞0.05），腺癌的阳性表达率及表达强度显著低于腺瘤（P＜0.01）。腺瘤中轻度不典型增生26例阳性，表达率为59.5％；中重度不典型
增生41例，阳性17例，阴性24例，表达率为41.5％，中重度不典型增生的表达率显著低于轻度不典型增生（P＜0.05）。见表1
图1正常结肠组织SSRT2免疫组化阳性染10x20倍；图2 结肠管状腺瘤中度非典型增生SSRT2免疫组化阳性染10x20倍；图3结肠管状绒毛状腺瘤重度非典型增生SSRT2免疫组化阳性染10x20倍；图4结肠中分化腺癌SSRT2免疫组化阳性染10x20倍
表1 SSTR2在不同结肠病理组织中的表达
2.2 SSTR2阳性表达与临床病理特征的关系：在结肠腺癌当中，SSTR2的表达与结肠腺癌的组织学分级、TNM分期和浸润深度之间没有明显的差异。高、中分化腺癌中阳性表现高于低分化腺癌（P＜0.05），低、中分化腺癌明显低于高分化腺癌（P＜0.03），与临床分期及浸润深度没有明显差异(各组之间均P>0．05)，见表2。
表2 SSTR2阳性表达与临床病理特征的关系
3 讨论
结肠腺瘤型息肉是一组良性肿瘤性病变，目前发现95％的早期大肠癌与腺瘤有关。多数人认为由正常上皮发展为大肠癌一般需经过上皮过度增生、腺瘤期(早、中、晚期)、癌变及癌浸润和转移等阶段，此进程需10～15年。Kozulea等研究表明，由重度不典型增生腺
瘤演变为早期癌需要3～6年。因此对于有癌变倾向的结肠腺瘤的早期诊断就有重要临床实用价值。有研究提示，胰腺癌、结肠癌中SSTR2表达下降，被认为是胰腺癌、结肠癌潜在的抑癌基因[1]。故探讨SSTR2在结肠腺瘤息肉癌变发生、发展中的表达情况，不仅具有肿瘤生物学意义，而且也有潜在的临床价值。
很多研究表明，一些肽类激素如表皮生长因子、胰岛素、胰岛素样生长因子、胃泌素、蛙皮素以及生长抑素等，可以通过其相应的受体调控胃肠道恶性肿瘤细胞的生长[2]。值得注意的是，生长抑素与生长抑素受体结合对包括大肠癌在内的多种消化道恶性肿瘤细胞的生长有抑制作用[3]。生长抑素及其类似物通过SSTR相关亚型的介导具有多种多样的生理与药理作用，包括经细胞内信号传导系统，使靶器官出现分泌受抑、分化停止、生长延缓、血流减少、代谢降低和运动减弱[4,7]。生长抑素受体（SSTR,SSR)是一种膜蛋白受体，属G蛋白偶联受体家族，含有7个跨膜区段的糖蛋白，效应子为腺苷酸环化酶、Ca2+通道、酪氨酸磷酸酶，具有识别不同化学信使的能力，并能通过一些直接或间接的偶联系统启动生物反应。细胞膜上SSTR含量很小，SST功能的关键是SSTR在细胞膜上的表达。现已克隆出5种SSTR亚型，1995年Vikic等以类癌和结肠癌为对象检测了SSTR的表达，发现SSTR2的表达在待测肿瘤组织中仅2例阴性，并认为肿瘤组织中所表达的SSTRs
以SSTR2为主。以后多项相关研究也提示生长抑素2型受体(SSTR2)与肿瘤的关系最为密切[8.9]。为明确SSTR2 mRNA在大肠癌中的表达特性，2005年代远斌[10]等应用多相寡核苷酸探针技术，对不同临床分期和分化程度大肠癌病变的ssTR2受体亚型mRNA表达进行原位杂交检测，具有较高的敏感性和特异性。结果显示，60例大肠癌SSTR2 mRNA总阳性率为58.3％(35／60)，按Dukes分级A、B、C、D期的顺序，SSTR2mRNA的阳性率与相对含量依次递减，提示SSTR2是机体阻滞肿瘤进展的一个环节，缺乏SSTR2比表达SSTR2的肿瘤细胞更具生长优势。按低、中、高分化的顺序，SSTR2 mRNA阳性表达和相对含量依次递增，说明SSTR2在分化好恶性程度低的大肠癌中比分化差、恶性程度高者表达高。提示SSTR2可以作为大肠癌细胞分化的标志物。
本研究显示SSTR2腺癌中的阳性率及表达强度显著低于正常组织（P＜0.01），与相关文献报道一致；本实验还显示高、中分化腺癌中阳性表现高于低分化腺癌（P＜0.05），低、中分化腺癌明显低于高分化腺癌（P＜0.03），虽然与Pinzani研究小组的研究方法不一样，但结果是一致的，SSTR2在分化好恶性程度低的大肠癌中比分化差、恶性程度高者表达高，SSTR2的表达与临床分期及浸润深度没有明显差异(各组之间均P>0．05)。本研究还显示腺癌中的阳性率及表达强度显著低于腺瘤（P＜0.01）；SSTR2的阳性表达腺瘤
组织低于正常组织，但无统计学意义（P＞0.05）；腺瘤中SSTR2的表达随着腺瘤不典型增生程度的增高而降低，中、重度不典型增生的明显低于轻度不典型增生（P＜0.03）；中、重度不典型增生的明显低于正常组织（P<0.03）。结果表明SSTR2的表达与结肠腺癌的发生有关，与结肠腺瘤型息肉向结肠腺癌的组织化学转变有关，提示SSTR2的阳性表达强度对诊断结肠腺瘤型息肉癌变有重要意义，有助于结肠癌前病变的监测和随访,对结肠癌高危人进行筛选,对结肠癌的早期诊断提供客观依据。
参 考 文 献
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