大肠菌测定
一、目的和要求
（1）学习与掌握食品中大肠菌的测定方法。
（2）了解大肠菌在食品卫生检验中的意义。
二、实验原理
大肠菌并非细菌学分类命名，是卫生细菌领域的用语，不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。系指一在37℃、24h能发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。利用稀释液体培养数理统计学原理，获得食品中大肠菌的最大或然数，即ＭＰＮ（most probable number）值。 三、需用的仪器或试剂等
恒温箱、天平、显微镜、平皿、试管、1mL吸管（3支/组）、1OmL吸管、量筒25mL、载玻片、30mL乳糖胆盐发酵管（9管/组）、3mL乳糖发酵管（9管/组）、伊红美兰琼脂培养基（ 9个/组）、蛋白胨、乳糖、胆盐、0.04%溴甲酚紫、磷酸氢二钾、琼脂、2%伊红Y溶液、0.65%美兰溶液、革兰氏染液、蒸馏水，精密pH试纸。0.85%生理盐水、生理盐水内放玻璃珠5-8颗。
四、实验步骤
1、检验程序：
2、操作步骤
星期二：检样稀释、乳糖发酵
1、配置乳糖胆盐发酵培养基（100ML），灭菌后分装培养基9支(10Ml/支左右)，同时配0.85%生理盐水225Mldct变换
（内置玻璃珠），0.85%生理盐水9Ml(3支)、灭菌。 2、包装1mL吸管3支、试管3支、灭菌。
4.1 检样稀释
海尔w36
4.1.1．以无菌操作将检样25mL放于含有225mL灭菌生理盐水瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇。——1：10（10-1）
4.1.2．用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水试管内，振摇试管混匀，作成l∶100（10-2）的稀释液。
4.1.3．另取l毫升灭菌吸管，按上项操作依次作10倍递增稀释液，做成1：1000（10-3），每递增稀释—次，换用—支lmL灭菌吸管。黑帮之地2
海尔t628拆机4.1.4．根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择3个稀释度（10-1，10-2，10-3），每个稀释度接种3管。
4.2 乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在lmL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1mL及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，每—稀释度接种3管，置36士l℃温箱内，培养24
士2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告大肠菌阴性，如有产气者，则按下列程序进行。
星期三：配置伊红美兰琼脂培养基50mL。灭菌后倒平板
国务院公报
4.3 分离培养
用接种环挑取产气的乳糖胆盐发酵管划线接种在伊红美兰琼脂平板上，置36士l℃温箱内，培养18～24h，然后取出观察菌落形态，并作革兰氏染和证实试验。
星期五: 配置乳糖发酵培养基；革兰氏染，显微镜检测。
4.4 证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌菌落l～2个进行革兰氏染，显微镜观察判断其是否为阴性菌。同时接种乳糖发酵管，置36士l℃温箱培养24士2h，观察产气情况。凡乳糖管产气，革兰氏染为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌阳性。
五、实验结果一个小村庄的故事教学设计
（1）将大肠菌检验结果填入表（P135）。
（2）根据证实为大肠菌阳性的管数，查MPN检素表(P260)，报告每100mL(g)大肠菌的最可能数。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议