组织切片PT和HE、PAS、PASH、PAST染方法比较

山东辱母案例分析张祥令;陈腾祥;臧贵勇;胡蓉

【摘要】目的:比较组织切片HE、PAS及PT染方法及镜下特点.方法:取大鼠肝脏,Camoy氏固定液固定,对肝组织HE、PAS及PT染,光学显微镜下观察染效果.结果:PT染法能清晰显示肝组织的细胞及细胞核轮廓,效果优于HE、PAS法.结论:PT染方法简单,成本低,细胞及细胞核轮廓更能清楚显示.

【期刊名称】《贵阳医学院学报》

【年(卷),期】2011(036)003

【总页数】2页(P319-320)

【关键词】高碘酸-雪夫染反应;显微镜检查;肝细胞

朱诺坦普尔

【作者】核酸染料张祥令;陈腾祥;臧贵勇;胡蓉

【作者单位】贵阳医学院组织与胚胎学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院生理学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院解剖学教研室,贵州贵阳550004;贵阳医学院组织与胚胎学教研室,贵州贵阳550004

【正文语种】中文

【中图分类】R329-33

组织切片的化学染有多种方法，其中苏木精-伊红染(hematoxylin eosin，HE)是国内最常用的方法之一，但是HE染试剂组成成分较多，配制相对复杂，更主要的是刚配制的HE试剂不能立即使用，需要至少1个月以上的成熟时间［1］，不太适于现配现用。在实际工作中，往往需要现配现用的试剂。资料显示，副品红-甲苯胺蓝染(PT)方法在国外用于组织染［2］，但在国内报道较少。本研究对PT染方法进行了摸索，并将其与HE、过碘酸-雪夫(Periodic Acid Schiff Reaction，PAS)染进行比较。

1 材料与方法

1.1 材料

寻梦奇地

1.1.1 动物SD大鼠，体重220～250 g，雌雄不限，贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(黔)2002-0001。

1.1.2 主要仪器和试剂切片机、贴片机和显微镜均为Leica公司产品，苏木素、伊红、甲苯胺蓝、副品红、碱性品红、高碘酸、盐酸等试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 试剂配制PT试剂配制:1%的甲苯胺蓝水溶液:1 g甲苯胺蓝+100 ml蒸馏水;0.1%的副品红水溶液∶0.1 g副品红+100 ml蒸馏水，试剂现用现配。Schiff试剂:按文献［1］方法配制。

1.2.2 组织标本取材固定包埋股动脉放血处死大鼠，取出肝脏，Carnoy氏固定液固定3 h，进入脱水剂100%酒精Ⅰ脱水2 h、100%酒精Ⅱ脱水2 h，进入半苯半酒精和透明剂二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明各2 h直至包埋，在半苯半蜡浸蜡40 min，蜡Ⅰ、蜡Ⅱ浸蜡各25 min，包埋成蜡块，切片厚6μm，贴片机38℃贴片，40℃温箱烤片4 d。

1.2.3 染(1)肝组织HE染:石蜡切片常规化蜡［3］，苏木精染、分、兰化、伊红上

、95%酒精分，二甲苯透明，中性树胶封片。(2)肝组织PAS、PASH和PAST染:化蜡至蒸馏水，入1%高碘酸氧化5 min，蒸馏水水洗，Schiff试剂染10 min，1张苏木精复染1 min(PASH)，另1张甲苯胺蓝染核1 min(PAST)，95%酒精分，二甲苯透明，中性树胶封片。(3)肝组织PT染:化蜡至蒸馏水，进入0.1%的副品红水溶液染5 min，95%酒精分，显微镜下镜检，入1%甲苯胺蓝水溶液染10 min，95%酒精分，染明显后二甲苯透明，中性树胶封片。

2 结果

从图1中可见，5种染方法均能对肝脏组织进行很好的染，但是效果各有特。HE能对细胞核和细胞质进行均匀染，细胞轮廓及细胞核轮廓清晰可见。PAS类染(PAS、PAST、PASH)对细胞质的染有选择性［4］，不均匀，但是染的细胞质颗粒感较强;PAS染缺乏染核，PASH的细胞核染为均质性的蓝染，而PAST的核染为淡蓝，对核膜染有选择性。PT对细胞核膜和细胞膜有较强的选择性，适度的着可以清晰地分辨细胞核膜与核仁，而且，对细胞外结缔组织也能很好的染，细胞质中仅见细胞骨架结构着。

图1 肝脏组织的5种化学染(HE、PAS、PAST、PASH、PT，×400)Fig.1 Liver tissue sections stained with 5 differentmethods

3 讨论

高斯分布

本实验呈现了肝组织的5种不同染剂的染效果，HE以伊红染细胞质，以苏木素染细胞核，着均匀，能清晰呈现细胞轮廓，伊红还能对胶原进行染［5］，但对肝组织间隙的染弱，而且HE试剂不能即配即用;PT染对细胞及细胞核轮廓更能清楚显示;PAS类的细胞轮廓感不强，但是它是一种特殊的染方法，对细胞质的染有选择性［4］，主要对糖原等多糖进行染［6］，如果在此基础上需要对核进行染，使用苏木精或甲苯胺蓝均可，但是如果糖原染太强，分掌握得不好，颜对比性就要差些。实验操作方面，PT使用简易，试剂配制简单，现配现用，成本低，染方法也简单;HE染剂是混合染料，需要苏木精、酒精、明矾、甘油、甲醇试剂混合配制，并且依次加入试剂，要放置日光下照射数日才能使用，试剂成熟至少需要1月左右。5种染方法比较，显示PT染有使用简易，能清楚显示组织结构的特点。

4 参考文献

［1］杜卓民主编.实用组织学技术［M］.北京:人民卫生出版社，1998:43-45，284.

［2］Luiz Junqueira，Carneiro，etal.Bsaic Histoloty［M］.Internation Edition，2005(11):319-322.

［3］郑燕璇，王晓鸿，苟新敏.石蜡切片HE染方法的探讨［J］.中国实用医学，2009(29):211.

［4］陈小萍，吴钦穗.PAS组织化学染的几点体会［J］.福建医药杂志，2006(6):178-179.

［5］梁燕清.常规HE染过程中分方法的比较［J］.解剖学研究，2010(5):封三.

爱上验尸官［6］付银锋.PAS染方法及应用［J］.河南科技大学学报，2008(2):100-101.

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