蓝白斑筛选标准操作规程

蓝白斑筛选标准操作规程（编号：009）

1、目的及适用范围

pGEM-T载体有多克隆区具有编码β-半乳糖苷酶的基因，插入失活的α-肽可在指示平板上通过蓝，白菌落直接筛选重组菌落。

2、主要仪器及试剂

微量移液器、玻璃涂布器、0.22µM滤器、恒温培养箱、x-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖甘）、IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖甘）农村文化建设论文>高甘油三酯血症

3、操作步骤

3.1 制备含相应抗生素（Amp+等）的琼脂平板。

3.2 于平板表面加x-gal 40µl和IPTG 4µL，用无菌玻璃涂布器将试剂均匀涂布于整个平板表面，37℃，1h，至所有液体都消失。

肾脏病学3.3 将200µL转化的菌液涂布于平板表面，37℃，20min后，倒置平板继续培养12-16h。

u503.4 终止培养，将平板置4℃，1-4h，观察确定蓝白斑。

3.5 挑取白菌落置3-5mL LB（含相应抗生素）液体培养基中，37℃，震荡培养8-12h，提取质粒，限制酶酶切分析进一步鉴定。三边测量法

附：

离心泵特性曲线

1、x-gal：20mg/mL

20mg x-gal 溶于1mL二甲基甲酰胺，-20℃避光保存。

2、IPTG：200mg/mL

1g IPTG 溶于4mL去离子双蒸水，定容至5mL，0.22µm滤器过滤除菌，-20℃避光保存。

本文发布于:2024-09-20 23:29:05，感谢您对本站的认可！

标签：平板涂布菌落筛选培养离子相应液体

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