陈迪和 lacz基因蓝白斑筛选是一种常用的遗传学试验老方法,它将使用到lacz基因编码β-D-葡萄糖苷酸脱氢酶(β-D-galactosidase),其主要功能在有机体内代谢β-D-葡萄糖苷酸产生糖醛(乳糖)和氢离子。由于该酶可以存在于排斥克隆组织(fibroblasts)或其它培养的细胞中,J. Werner先生和同事设计了利用它们的遗传学试验老方法——lacz基因蓝白斑筛选。文曲星tc1000
该方法以细胞内β-D-葡萄糖苷酸脱氢酶和外源染料IPTG(isopropylthio β-D-葡萄糖苷酸)为基础,IPTG通过细胞膜有序通过,进入细胞内,结合到lacz基因编码的蛋白,该蛋白便可以活化β-D-葡萄糖苷酸的水解活性(hydrolase activity),使它的催化效率提升,从而使其合成的乳糖在细胞外被缓冲液中的蓝染料X-gal(4-chloro-galactosamine)代谢成蓝的产物,从而得到可见的显蓝现象。在缺乏IPTG的情况下,细胞中无法代谢X-gal,以致所有的细胞都是白,因此也得名蓝白斑筛选。
马来酸酐 利用lacz基因蓝白斑筛选可以筛选出细胞中带有某项染体片段的需要的外源基因,并将其储存到受体的染体细胞中。如果外源基因融合到接受体主基因的相邻嵌入位置,会
45钢产生活性的β-D-葡萄糖苷酸脱氢酶,当添加IPTG(isopropylthio β-D-葡萄糖苷酸)时,形成表蓝染现象,显示出成功的染体克隆;而外源基因未在相邻嵌入区域,细胞内无编码活性蛋白,故不会出现显蓝现象,全部细胞都白,显示出失败的结果。
该方法特别适合于大量作物选育和转基因技术,因为它快速、有效的检测外源基因的嵌入情况,可以有效的筛选出转基因植物。因此,该方法可以在植物转基因研究和大规模作物培育和繁殖中得到广泛应用和利用。
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