一、 材料
1. 6-9周小鼠（GFP+小鼠、野生型小鼠）
絮凝剂2. 配制培养液：RPMI 1640培养液+1×GlutaMax（Gibco）+10%FBS（热失活） 3. 盐溶液：0.9%氯化钠溶液（无菌），储存于4度。 4. 纯化的重组M-CSF（CSF-1）：到货后灭菌PCR管分装。
5. 消毒后的手术器械。
6. 70%乙醇溶液。
7. 27G针头
8. 20ml注射器
9. 低绒纸巾
10. 100mm培养皿
11. 3个50ml离心管
二、 方法
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乌拉圭回合1. 复温培养液（预添加M-CSF）至37摄氏度。
钋-2102. 处死小鼠，喷洒70%乙醇溶液消毒。拉扯双侧后腿直至听到清脆响声（提示股骨从髋骨脱臼）。 3. 使用干净的剪刀、镊子沿一侧大腿环形剪开皮肤，向爪子方向剥离皮肤。
4. 用镊子将腿部肌肉分开，露出股骨和胫骨（注意不要损伤骨头）。
5. 切断股骨与髋骨间的韧带，切下膝关节以下的骨头。将股骨和胫骨至于冰冷的盐溶液中。
6. 同法处理另一只腿。
7. 用低绒纸巾小心剥除骨骼上附着的组织，将骨头置入70%乙醇溶液中。
8. 20ml无菌注射器吸满预热的培养液（无添加M-CSF），装上27G针头。并准备好50ml离心管。穿过骨头抚摩你
9. 从膝关节处分离股骨和胫骨，丢弃膝盖骨。一个无菌镊夹住股骨，用一把无菌剪刀剪掉股骨上端。将针头插入骨髓腔，用培养液反复冲洗，将骨髓冲入50ml离心管。冲洗过程中，上下移动针头刮扫骨髓腔。每根骨头使用大约5ml培养液。丢弃骨头。
10. 同法处理胫骨（剪掉上下两端）。
msdn11. 将细胞悬液离心（150g，5分钟）。丢弃上清，加入培养液（添加M-CSF）。混匀细胞悬液。
12. 每根骨头准备两个100mm培养皿。将细胞悬液打入培养皿，添加预热培养液（添加M-CSF）至10ml。
13. 置于37摄氏度、5%二氧化碳培养箱内培养5天。
14. 第5天，使用室温盐溶液5ml冲洗培养皿（巨噬细胞为贴壁生长）。使用细胞刮刀刮下贴壁细胞，转移入离心管，150g离心5分钟。分离的细胞建议2天内使用。
关于M-CSF的工作浓度：介于1ng/ml到1ug/ml之间。
设定浓度梯度培养：如1ng/ml 10ng/ml 100ng/ml 1ug/ml，或倍比稀释。按上述方法培养5日后，细胞计数5×107/培养皿为最合适M-CSF工作浓度。
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