一、实验目的
2、理解和验证伴性遗传和分离、连锁交换定律：
3、学习和掌握基因定位的方法
4、加深理解孟三个遗传定律
二、实验原理
红眼与白眼是一对相对性状，控制该对性状的基因（W）位于X染体上，且红眼（W）对白眼（w）为完全显性。当红眼雌蝇与白眼雄蝇杂交时，无论雌雄均为红眼，F2中红眼:白眼=3:1，但雌蝇全为红眼，雄蝇中红眼:白眼=1:1；反交时F1中雌蝇为红眼，雄蝇为白眼，F2中红眼:白眼=1:1，雌蝇和雄蝇中的红眼与白眼的比例均为1:1。
正常翅（Sn3）对小翅（sn3）为显性，正常刚毛（M）对焦刚毛（m）为显性，与红眼（W）和白眼（w）一样，均位于（X）染体上。利用三点测交的方法只需通过一次杂交和一次测交就能同时确定三个基因在染体上的位置顺序和基因的相对距离，绘出连锁图。
让白眼小翅焦刚毛♀蝇与野生型♂蝇杂交，F1雌蝇是三杂合体：表型为野生型。F1♂蝇是白眼焦刚毛小翅。F1代的雌雄蝇互交实际上相当于三杂合体雌蝇与三隐性雄蝇的测交。通过对互交后代中各种表型比例的分析，就可进行w、sn3和m等基因的定位。
三、实验材料、器具和试剂
1、实验材料
野生型雄蝇、雌蝇、白眼焦刚毛小翅雌雄蝇。
野生型品系：长翅，直刚毛，红眼
突变型品系：小型翅，卷刚毛，白眼
2、实验器具
放大镜、显微镜、麻醉瓶、白瓷板、毛笔、记录本。
3实验试剂
乙醚、酒精棉球、培养基。
四、实验步骤
1.选处女蝇
选白眼焦刚毛小翅处女蝇8只，同时选野生型处女蝇8只。方法:将野生型和白眼焦刚毛小翅果蝇培养瓶内的成蝇全部赶去，12小时内将重新孵化出的雌雄果蝇分开，即可得所需处女蝇和雄蝇。
2.杂交
将白眼焦刚毛小翅处女蝇麻醉，并挑取野生型♂蝇8只麻醉后放入培养瓶，此杂交组合可用
作伴性遗传和基因定位的观察统计。将野生型处女蝇8只麻醉，同时将同样数量的白眼焦刚毛小翅雄蝇麻醉，放入培养瓶，此组合用于分离定律和伴性遗传实验的反交。贴好标签。注明杂交组合和日期，学生姓名。
3. 25℃条件下培养
7～8天后，赶去亲本蝇。
4.观察F1中医美容学
11～13天后，F1代羽化，用放大镜对正交组合的F1进行观察，看F1雌蝇是否为野生型，雄蝇是否全为三隐性，若不是，表明处女蝇是非处女蝇，实验失败。
5.F1正交
选8对F1雌雄蝇麻醉，转入新的培养瓶，进行正交，贴好标签。
6.halliday放飞F1
8天后赶去F1。
7.观察F2
12天后，F2羽化，将其麻醉后于白瓷板上用放大镜观察，或用解剖镜、显微镜观察各种表型的果蝇并统计数目，每隔2天观察一次，连续4次。统计后的果蝇倒入死蝇盛留器中。
结果记录
表一 正交F1代果蝇的性状
时间 | 正交（白眼♀×红眼♂） |
红眼♀ | 白眼♂ |
10月24日 | 8 | 3 |
10月25日 | 24 | 16 |
10月26日 | 42 | 53 |
10月28日 | 34 | 34 |
总数 | 110 | 106 |
比例 | 51% | 49% |
| | |
表二 正交F2代的性状
时间 | 正交F2 |
红眼♀ | 白眼♂ | 红眼♂ | 白眼♀ |
10月30日 | 2 | 1 | 0 | 4 |
11月2日 | 5 | 5 | 4 | 6 |
11月4日 | 18 | 10 | 16 | 12 |
11月6日 | 27 | 20 | 24 | 23 |
总数 | 52 | 36 | 44 | 45 |
比例 | 29% | 20% | 25% | 26% |
| | | | |
从以上表一，表二可知正交试验中F1红眼果蝇的数量和白眼果蝇的数量之比为1:1，正交试验中F2雌性果蝇和雄性果蝇之比为1:1且红眼果蝇与白眼果蝇数量之比也是1:1
表三 正交组合F2的数据分析
| 正交组合F2 |
刷镀液红眼♂ | 红眼♀ | 白眼♂ | 白眼♀ | 合计 |
实际观察数（O） | 44 | 52 | 36 | 45 | 177 |
理论预期数（C） | 45 | 45 | 45 | 45 | 180 |
离均差（O-C） | -1 | 7 | -9 | 0 | -3 |
（O-C）2/C | 0.0222 | 1.0889 | 1.8 | 保皇派0 | 2.9111 |
| | | | | |
查卡方表，自由度N=4-1=3，卡方值为2.9111，0.250＜P＜0.500，表明实验结果与理论数无显著差异，实验值符合理论值。
表四 “三点测交试验”中观察的记录
测交后代表现型 | 基因型 | 统计日期 | 总数 | 比例 | 基因间是否发生交换 |
10.30 | 11.02 | 11.04 | 11.06 | w-sn3美狄亚 | sn3-m | w-m |
白眼焦刚毛小翅 | w | sn3 | m | 4 | 6 | 12 | 29 | 51 | 65.0% | | | |
红眼直刚毛长翅 | + | + | + | 2 | 7 | 22 | 33 | 64 | | | | |
白眼直刚毛长翅 | w | + | + | 0 | 2 | 7 | 9 | 18 | 19.2% | √ | | √ |
红眼焦刚毛小翅 | + | sn3 | m | 1 | 0 | 4 | 11 | 16 |
红眼焦刚毛长翅 | + | sn3 | + | 0 | 1 | 1 | 2 | 4 | 4.0% | √ | √ | |
白眼直刚毛小翅 | w | + | m | 0 | 2 | 0 | 1 | 3 |
红眼直刚毛小翅 | + | + | m | 0 | 1 | 6 | 5 | 12 | 11.8% | | √ | √ |
白眼焦刚毛长翅 | w | sn3 | + | 1 | 1 | 3 | 4 | 9 |
总计 | 8 | 20 | 55 | 91 | 177 | 100% | | | |
交换值 | 23.2% | 15.8% | 31.0% |
| | | | | | | | | | | | |
分析
正交图谱分析
正交
P： XWXw（雌红眼）×XwY（雄白眼）
F1: XWXw(雌红眼) XWY（雄红眼）
理论： 1 ： 1
实际： 110 客户联盟： 106
F2： XWXw XwXw XWY XwY
雌红眼 雌白眼 雄红眼 雄白眼
理论 1 ： 1 ： 1 ： 1
实际 52 45 44 36
图1 正交F1和F2的图谱分析
从以上图谱分析可知正交试验中F1红眼果蝇的数量和白眼果蝇的数量之比为1:1，正交试验中F2雌性果蝇和雄性果蝇之比为1:1且红眼果蝇与白眼果蝇数量之比也是1:1。另外，我们可以通过果蝇杂交来验证分离定律，果蝇杂交实验是以果蝇为实验材料，来验证遗传学中的分离规律、自由组合规律和连锁互换规律 [1-3]。
三点测交分析
各基因间交换值计算：
Ｐ（w-sn3）＝19.2%＋4.0%＝23.2ｍ.u.
Ｐ（sn3-m）＝4.0%＋11.8%＝15.8m.u.
Ｐ（w-m）＝19.2%＋11.8%＝31m.u.
由计算结果可知，w-m间的交换值小于w- sn3与sn3-m间交换值之和，这是因为两个相距较远的基因发生了双交换的结果。根据表中数据观察以及遗传作图，可以分析出w-m间发生双交换能产出两种类型的果蝇：m+w（小翅、直刚毛、白眼）和+sn3+(长翅、卷刚毛、红眼)，这两种果蝇计有7只（4%），在计算w-m间交换值时，这个组没有被计算进去。因为是双交换，所以再乘以2，得4%×2=8%。这就是校正值。
校正之后的w-m间的重组值P（w-m）＝19.2%＋11.9%+4%×2＝39.0m.u.
·遗传作图
实验遗传连锁图
w Sn3 m
23.2 15.8
39.0
理论遗传连锁图
w Sn m
15.1 19.6
34.6
图 2. w，sn3，m遗传连锁图
讨论
对于以上正交的结果，我们首先进行了图谱分析，发现理论值之比与实际值值比有一定
的差距，因此我们进行了卡方检测，自由度N=4-1=3，卡方值为2.9111，0.250＜P＜0.500，表明实验结果与理论数无显著差异，实验值符合理论值。
由以上分析数据可以看出，本组实验结果与理论值也存在一定的差距，产生数据偏差的原因可能可能有
1、 进行试验的环境条件有差异，由于不同环境条件下的重组值是有变化的。
2、 数量太少，进行三点测交需要大量的数量，实验数据越多越精确，实验室中果蝇数目有限这就对实验结果影响力加大，也是导致结果与理论值有偏差的原因之一[3]。
3、 由于三隐性个体果蝇的生存力很弱，在幼虫密度较高时易在自然选择中被淘汰，在实验中此因素也有可能引起误差。
4、 观察果蝇时，有一些观察不到放走的，死掉的或者没有观察清楚的等等诸多因素都会影响到实验的结果。
虽然与理论结果定量结果存在一定偏差，但是此实验还是可以准确地反映三个基因的连锁位置关系。
六、参考文献
[1]路淑霞，常重杰，卢龙斗，等．果蝇杂交实验方案的设计与安排[J]．生物学通报，2000 (11)：36—37．
[2]钱远槐，张菁，曾庆韬，等．果蝇综合大实验改革探索[J]．湖北大学学报(自然科学版)，1996(1)：90—93．
[3]李国泰．白眼残翅果蝇的培养及遗传分析[J]．通化师范学院学报。2004 (10)：55—56．
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