Guideline on development, production, characterisation and specification for
monoclonal antibodies and related products,EMA/CHMP/BWP/532517/2008
1、研发阶段
1.1 结构
应阐明抗体在作用机理、生物活性和稳定性方面的结构特征，至少包括抗体的免疫化学属性（例如亲和力，组织交叉反应，同种型[isotype]，同种异型[allotype]）的合理性，效应子功能对抗体活性的重要性和效应子功能的完整性。谨慎考虑可能在患者身上产生抗体反应的风险，特别当单抗与人Ig不是高度同源时，或者 在抗体结构上鉴定出潜在的免疫原性表位时。这可能会导致临床不良反应和/或
改变潜能。
1.2 细胞系黑龙江省教育学院学报
生产单抗的细胞基质应为稳定、连续的单克隆细胞系。应阐明选用该细胞系的理由，说明与其他途径相
比该细胞系有能力生产出预期的产品。重组DNA技术获得的细胞基质应遵循“Production and Quality Control of medicinal products derived by recombinant DNA technology”(3AB1A)，以及相关的ICH指导原则Q5A (viral safety)，Q5B (expression constructs)和Q5D (cell substrates)。 分离单克隆细胞系前的过程，如细胞融合、病毒转化、噬菌体展示筛选所用的基因库、体内和体外技术等内容无需太详细描述。但关乎产品安全性和有效性的信息，如氨基酸和翻译后修饰等对免疫原性或效应子功能有影响的改变、外源试剂和潜在污染物的使用等，需要提交充分的资料来评价单克隆细胞系的同一性和纯度。 慎重考虑通过细胞融合或转化获得的永生化人/非人B淋巴细胞作为单克隆
细胞系。以人B淋巴细胞作为母细胞系会带来传染性病原体（包括变异型克雅
氏病[variant Creutzfeldt-Jakob disease，vCJD]和EB病毒）的传播隐患。通过融合骨髓瘤细胞和人/非人B淋巴细胞形成的杂交瘤细胞系也可作为细胞基质，其来
源和母细胞特征需要详细的记录，包括捐助者健康史方面的信息，参与融合的另外细胞及其对人或动物源材料的暴露信息（例如饲养细胞和骨髓瘤细胞）。
2、生产阶段
2.1 一般考虑
生产工艺应经过恰当的描述和验证。验证应包括：1.生产工艺能生产出质量一致的产品，与制定的控制策略一致；2.评价工艺能力（例如去除工艺相关杂质和病毒）；3.操作单元的可操作性（如对纯化柱和无菌灌装的验证）。应关注过程控制的设置，包括产品质量属性和工艺参数，同时也要关注药物本身和产品质量标准。这些控制应能监测相关质量属性，如产品相关物质和杂质（如二硫键的完整性或错配、脱酰胺、氧化、截断、聚体）或工艺相关杂质（如宿主细胞蛋白、DNA、蛋白A、牛血清和培养基残留），以及相关的工艺参数（例如柱载量、pH、温度）。
如果工艺中用到蛋白A，蛋白A的来源（金黄葡萄清洁或重组），生产方法（如利用人IgG纯化）应详细记录。应证明IgG的质量能满足预期用途，需
二级医院
特别关注病毒安全。
2.2 平台化生产
采用平台化生产时，其生产工艺应在注册申请时（NDA）时得到充分验证。验证应采用拟商用化生产的工艺和地点。如果其他相关的经验已经充分论证和记录，这些相关数据可用于支持或减少新产品的验证。
由于特定产品的质量属性具有特异性，因此产品或工艺涉及的分析方法、控制策略的适用性应进行证明。相同平台生产的其他产品的控制策略可能不适用于申报的新品种，需要重新考虑。例如，工艺相关杂质如宿主细胞蛋白（HCP）与工艺高度相关，相同平台下一个产品的控制参数可能不适合于其他产品（例如来自相同母细胞系的不同细胞基质，类似的培养和纯化条件）。 已注册的平台生产工艺发生变更时应对涉及的产品各自进行影响评估。不过，如果其他变更后产品的相关经验数据已经充分论证和记录，那这些数据可用于支持或减少新产品的验证。几种产品共用相同的通用平台工艺，如果某种或某几种产品工艺发生改变（如工艺优化或改进）时，其他产品也进行修改或不修改应具体说明理由。
2.3 病毒安全
本指导原则涵盖的单抗产品的病毒安全要求应符合ICH Q5A。本指导原则涵盖杂交瘤细和基因重组细胞。如果抗体来源于动物（例如转基因动物），应遵循ICH Q5A，同时参考附件1。来源细胞（如宿主细胞）应对外来因子（例如内源和外源因子）进行适当筛选。应根据生产细胞的组织来源和其他生物原料的自然属性来选择合适的病毒进行测试。
病毒去除效果应进行很好的验证，应按照ICH Q5A的要求对工艺步骤对病毒去除效果进行验证。验证应采用产品的中间体来进行，以期覆盖潜在的或者非预期的能影响病毒去除效果的产品特异性的因素。
如果相关产品（例如利用平台化生产的产品）得到很好的评价和记录，同时能帮助建立和评价病毒去除步骤，这样可以有助于减少待提交验证数量。支持性数据包括，潜在的影响病毒去除偏移的参数、分离柱多个循环后的柱效、病毒残留或柱消毒研究。应说明为何内部数据能用于新产品，例如病毒去除前的产品生化性质具有可比性，并且纯化采用相同的方法。应对生产步骤支持性的内部数据进行临界值分析，并分析各中间体的组成。生产者的分析验证结论应充分证明在所有情况下，已建立的生产步骤对病毒去除/灭活的能力是相似的。如果步骤对比不完全信服，或者数据库不能排除产品特异性的病毒去除效果影响，必须用产品特异性的中间体来确认。
秦皇岛雾霾如果研发过程中使用了牛或其他TSE相关动物，应参考指导原则“Minimising the Risk of Transmitting Animal Spongiform Encephalopathy Agents via Human and Veterinary Medicinal Products”(EMEA/410/01)。
3、单抗表征
3.1 一般考虑
月亮的心愿教学设计单抗应进行彻底的表征，包括理化和免疫化学性质、生物活性、纯度、杂质和含量，应与ICH Q6B指导原则一致。提交申请时（NDA）内部参比品应已建立，以便用于放行时的生物和理化检测。
3.2 理化分析
单抗的类型、亚型、轻链组成（κ和/或λ）和主要结构。采用合适的方法确证氨基酸序列（例如肽图、氨基酸测序、质谱分析），N和C端氨基酸序列变异性分析（如C端赖氨酸）。游离巯基和二硫键，完整的二硫键和错配二硫键。
碳水化合物含量（中性糖，氨基糖和唾液酸）。此外，碳水化合物链的结构，糖型（天线类型），糖基化位点及比例。通常，单抗重链Fc上都有一个N糖位点，轻链无糖基化修饰，重链其他位点也可能出现糖基化修饰。因此，其他位点的糖基化修饰也需确证。糖型结构应表征，特别应关注甘露糖基化，半乳糖基化，岩藻糖基化，唾液酸化的比例，糖型比例（G0，G1和G2）。
采用合适的理化分析方法测定单抗的高级结构。
3.3 免疫特性
单抗的免疫学属性应进行充分的表征。与纯抗原的结合分析以及抗原结合表位都需要提供。可能的话，亲和力（affinity）、亲合力（avidity）和免疫反应（包括与其他结构性同源蛋白的交叉反应）也需要研究。与目标靶点不同的其他组织的非特异性反应/细胞毒性也需要说明。与不同组织间的交叉反应也应采用免疫组化的方法（附件1）进行试验。在适当情况下临床前或临床切片可以交叉引用。
互补决定区（CDR）也需要鉴定，除非有正当理由。抗原表位和与抗原表位结合的相关分子都需要说
明。应包括采用生化方法鉴别这些结构（例如蛋白、寡糖、糖蛋白和糖脂），其他表征研究（氨基酸序列，碳水化合物结构）可进一步进行确证。
清远地震补体结合活性，和/或其他效应子功能也应进行评价，即使生物学活性不依赖这些作用。
3.4 生物学活性
应采用合适的体外方法分析生物学活性。如果需要体内分析方法，应说明理由。作用机理以及与产品安全性有效性相关的效应子功能的重要性（或者序列）应进行说明。
在抗体作用机理上起重要角的效应子功能，和/或对产品安全性和有效性有影响的部分，对ADCC充分分析，细胞毒作用（例如凋亡），补体结合和活化能力以及其他效应子功能，包括Fcγ受体结合活性和新生儿Fc受体（FcRn）结合活性等也需要酌情说明。
3.5 纯度、杂质和污染物
吉尔吉斯族单抗通常会表现出多种异质性（例如C末端赖氨酸加工，N末端焦谷氨酸环化，脱酰胺，氧化，异构化，碎片化，二硫键错配，N连接寡糖，糖基化），这产生了复杂的纯度/杂质属性，包含多种分子实体或异质体。这些纯度/杂质属性应采用一系列不同的正交方法进行分析，应针对产品相关异质体制定单一的和/或总的接受标准。
这些方法包括理化性质（分子量或大小，异构体情况，消光系数，电泳属性，谱属性和光谱属性）。此外，应采用合适的方法对电荷异质体进行定性和定量分析。
多聚体和聚体也应采用一系列的方法进行表征。聚体的形成，药品中可见和不可见微粒很重要，在批放行和稳定性研究中应进行调查并密切监测。除采用药典方法外，可能也需要其他正交分析方法来分析其水平和性质。
潜在的工艺相关杂质（例如HCP，宿主DNA，细胞培养残留，下游工艺残留）也需要鉴定，并视情况进行定性和定量评价。
污染物，包括所有偶然引入的物质（微生物，内毒素）应严格避免和/或合理控制。对于非内毒素类的促炎症污染物，如肽聚糖，如果怀疑有，应考虑进行单核细胞活化测试。
3.6 定量
应采用合适的理化和/或免疫化学分析方法进行定量。应证明采用的生物分析方法得到的数据直接与定量相关。如果存在相关性，可直接测量抗体的质量来代替测定其生物活性（例如灌装时）。
4、质量标准
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