谷物籽粒等氨基酸的
前处理方法
1 适用范围
本标准适用于氨基酸分析仪测定谷物籽粒中氨基酸含量的样品前 处理。
2 方法原理
谷物籽粒中的氨基酸，系按一定顺序结合成不同类型的肽和蛋白
质，因而在测定前
要用一定浓度的酸使蛋白质中肽键断裂，水解成多种氨基酸后，用 氨基酸分析仪测定。
由于氨酸在酸性溶液中水解时易被破坏，须用碱水解。
3 仪器设备
3.1 分析天平：感量0.0001g。
3.2 实验室用粉碎机。
3.3 喷灯。
3.4 真空泵。
3.5 真空规。
3.6 恒温干燥箱。
3.7 水解管：用九五料玻璃制的球形管或圆底试管。体积15-20ml。
3.8 聚四氟乙烯管:φ10×100mm。金融英语证书
3.9 玻璃试管：φ15×180mm。
3.10 浓缩器（可控温，减压）或真空干燥器。
3.11 容量瓶：25ml。
4 试剂
除注明者外均为分析纯。配制试剂均用去离子水，电导率大于
1m,-1。
4.1 6mol/L盐酸：盐酸（GB622—77），优级纯，与水按1.1混合。
4.2 4mol/L氢氧化锂：用水溶解168.8g氢氧化锂
（Q/HG12—325—83），稀释至1000ml。
4.3 pH2.2缓冲液：19.6g柠檬酸三钠（HG3—1298—80）用水溶解后，加入16.5ml盐
辛亥革命110周年讲话酸（GB622—77，优级纯），5ml25%硫代双乙醇，1g苯酚
（HG3—1165—78），最后定
容至1000ml。
4.4 pH4.3缓冲液：14 71g柠檬酸三钠（HG 3—1298—80）和2.92g 氯化钠（GB1266—77），
10.50g柠檬酸（HG3—1108—81），溶解在500ml水中，再加入
5ml25%硫
代双乙醇，0.1ml辛酸，最后定容至1000ml。上海新型建材矿棉厂
4.5 冷冻剂：液氮或干冰加丙酮（或加乙醇）。
5 试样制备
5.1 取有代表性的样品，用四分法分取25g左右，拣去杂质，带壳籽粒进行脱壳。
5.2 将样品放在60-65 恒温干燥箱中。干燥8h左右冷却后在粉碎机中碾碎，全部通
过孔径为0.25mm的筛子，充分混匀后装入磨口瓶中备用。
6 处理方法
6.1 酸水解步骤
6.1.1 称样
称取样品30.5mg，准确至0.1mg，置于水解管中，同时另称样品按GB3523—83
《谷类、油料作物种子水分测定法》，测定水分含量。
6.1.2 水解
中国妇幼保健研究6.1.2.1 在水解管内加入6mol/L盐酸10ml，在距管口2cm左右处，
用喷灯灼烧并拉一
细颈。再将管子放入冷冻剂中，冷却至溶液呈固体后取出，接在真空泵的抽气管上，使
减压至7Pa（≤5×10.2mmHg）后封口。
6.1.2.2 将封好口的水解管放在110±01℃的恒温干燥箱内，水解
22-24h后，取出冷
却。
6.1.2.3 打开水解管，将水解液定量转移到25ml容量瓶内，定容过滤，吸取滤液1ml，
用旋转浓缩器（45-50℃）或置于真空干燥器内真空干燥，残留物用1-2ml去离子水
溶解蒸干，如此反复进行1-2次，最后一次蒸干后，加pH2.2缓冲液溶解，供仪器测
定。
6.2 碱水解步骤
6.2.1 称样
称取样品60±5mg准确至0.1mg，置于聚四氟乙烯管内，同时按GB3523—83测定
水分。
6.2.2 水解
6.2.2.1 在聚四氟乙烯管内加入4mol/L氢氧化锂1ml，使样品均匀湿润，然后把管子
放入玻璃试管中，在玻璃管上端，离聚四氟乙烯管4-5cm处，用喷灯灼烧并拉一细颈，
再放到冷冻剂中，冷却至溶液呈固体后取出，接在真空泵的抽气管上，减压至7Pa（≤
5.10-2mmHg）后封口。
6.2.2.2 把管子放在110±1℃的恒温干燥箱内水解20h，取出冷却，
将水解液定量转移
到25ml容量瓶内，用6mol/L盐酸中和后，再用pH4.3的缓冲液定
容，过滤后供测定
氨酸用。
附录A
氨基酸分析仪测定的结果计算
（补充件）
A.1 计算公式
A
某种氨基酸，%（干基）=---------×10的负6次方×25×100
m（1-H）
式中：A——测得的某种氨基酸在每毫升水解液中的含量，mg；
m——样品的质量，mg；
H——样品的水分百分率；
25——稀释倍数。
A.2 结果表示
两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留小数点后有效
数字两位。
A.3 结果的允许差
生物碳
两个平行测定值相对差不得大于8%。
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